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維生素K2（發(fā)酵法）液相色譜分析方法
閱讀：6463 發(fā)布時(shí)間：2018-9-13維生素K2（發(fā)酵法）液相色譜分析方法(衛(wèi)計(jì)委2016年第8號(hào))
A.4 維生素K2含量的測(cè)定
A.4.1試劑和材料
A.4.1.1維生素K2標(biāo)準(zhǔn)品（七烯甲萘醌，MK-7）。
A.4.1.2異丙醇：分析純。
A.4.1.3甲醇：色譜純。
A.4.2儀器和設(shè)備
A.4.2.1液相色譜儀。
A.4.2.2紫外光檢測(cè)器：可變波長(zhǎng)。
A.4.2.3數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：色譜工作站或數(shù)據(jù)處理機(jī)。
A.4.3參考色譜條件
推薦的色譜柱及典型操作條件如下表A.1，其他能達(dá)到同等分離程度的色譜柱和色譜操作條件均可使用。
A.1色譜柱和色譜操作條件
| 色譜柱 | C18 (ODS)柱，柱長(zhǎng)150 mm，內(nèi)徑4.6mm，內(nèi)裝C18填充物，粒徑5μm或是相當(dāng)者 |
| 柱溫/℃ | 50 |
| 流動(dòng)相 | 甲醇 |
| 流速/ mL/min | 1.0 |
| 檢測(cè)波長(zhǎng)/nm | 254 |
| 進(jìn)樣量/ μL | 10 |
A.4.4分析步驟
A.4.4.1 試樣溶液處理
精密稱取試樣適量（至0.001 g）于10 mL容量瓶中，加入異丙醇超聲30 min，用異丙醇定容至刻度，搖勻，過(guò)0.45 μm濾膜，得上樣試樣。
A.4.4.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制
精密稱取七烯甲萘醌標(biāo)準(zhǔn)品適量，用異丙醇溶解并定容，配制成濃度為20 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
A.4.4.3 試樣測(cè)定
用標(biāo)準(zhǔn)品和試樣溶液10 µL注入液相色譜儀中測(cè)定，以保留時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法定量。
A.4.5結(jié)果計(jì)算
維生素K2的含量w，單位為微克每克(μg/g)，按式（A.1）計(jì)算：
………………………………………………（A.1）
式中：
A1——試樣中維生素K2（七烯甲萘醌）對(duì)應(yīng)峰面積；
A2——標(biāo)準(zhǔn)品中維生素K2（七烯甲萘醌）對(duì)應(yīng)峰面積；
c1——進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品中維生素K2（七烯甲萘醌）的濃度，單位為微克每毫升（µg/mL）；
V1——供試試樣定容體積，單位為毫升（mL）；
m1——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。
試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的差值不大于算術(shù)平均值的10 %。
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