近年來，在液相色譜分析領(lǐng)域，“快速分析”的話題越來越多被提起。

在2020年版《中國藥典編制大綱》中，也提到“積極倡導(dǎo)綠色標(biāo)準(zhǔn)和經(jīng)濟(jì)標(biāo)準(zhǔn)，推廣采用毒性小、污染少、節(jié)約資源、保護(hù)環(huán)境、簡便實(shí)用的檢測方法”。

我們總結(jié)了一系列快速分析中色譜柱的選擇攻略，這是后一篇啦~沒看過前面的老師可以點(diǎn)擊文字標(biāo)題查看喲~↓↓↓

★ 快速分析時(shí)的關(guān)鍵因素

：關(guān)于粒徑（點(diǎn)擊查看）

第二彈：關(guān)于流速與柱壓（點(diǎn)擊查看）

★ 快速分析時(shí)色譜柱特性的關(guān)鍵點(diǎn)

第三彈：填充技術(shù)與高流*果（點(diǎn)擊查看）

第四彈：色譜柱的化學(xué)性質(zhì)（點(diǎn)擊查看）

第五彈：關(guān)于流動相的置換速度

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流動相的置換速度

設(shè)定好的流動相條件在色譜柱中的置換速度對快速分析來說至關(guān)重要。

全多孔型填料的保留能力及負(fù)載量都很優(yōu)秀，但細(xì)孔內(nèi)的擴(kuò)散會導(dǎo)致色譜柱內(nèi)的液體組成變化需要一定的時(shí)間。

如下圖所示，當(dāng)填料粒徑縮小時(shí)，在構(gòu)造上，由于擴(kuò)散帶來的液體置換范圍變窄，因此液體置換速度更快——在進(jìn)行梯度條件的多組分分析時(shí)，流動相的置換速度將對分析結(jié)果產(chǎn)生很大影響。

▲ 不同尺寸填料粒子的擴(kuò)散情況

下面，將通過展示一個(gè)肽譜分析數(shù)據(jù)例，說明不同粒徑尺寸對于流動相置換速度的影響。

如下圖，分別使用5 μm的MGIII和2 μm的IF柱，在40分鐘的梯度條件下對人血白蛋白胰蛋白酶分解物進(jìn)行分析。

IF柱所得結(jié)果與MGIII相比，各色譜峰之間的整體分離度未見明顯提升，反而由于小粒徑導(dǎo)致高柱壓，*沒有體現(xiàn)出小粒徑色譜柱的優(yōu)勢。這是因?yàn)樘盍狭Ｗ颖砻嬖?span style="background-color:rgb(254,255,255); color:rgb(140,187,187)">平緩的梯度條件下，由于擴(kuò)散作用導(dǎo)致流動相置換速度變慢，因此填料粒徑所帶來分離性能上的差別未能在結(jié)果中體現(xiàn)出來。

▲ 一般梯度條件下人血白蛋白胰蛋白酶分解物的分析結(jié)果

流動相：A) 0.05 vol% TFA水溶液

             B) 0.05 vol% TFA乙腈水溶液

           B  2% （0.0 min）-> 50% (40 min) -> 2% (40 min) -> 2% (43 min)

流　速：200 μL/ min

檢測器：UV 210 nm

樣　品：人血白蛋白胰蛋白酶分解物

進(jìn)樣量：2 μL

如下圖，在8分鐘的快速梯度分析結(jié)果中，則體現(xiàn)了粒徑差異對分析的顯著影響：

▲ 快速梯度條件下人血白蛋白胰蛋白酶分解物的分析結(jié)果

流動相：A) 0.05 vol% TFA水溶液

             B) 0.05 vol% TFA乙腈水溶液

           B  2% （0.0 min）-> 50% (8 min) -> 2% (8 min) -> 2% (10 min)

流　速：200 μL/ min

檢測器：UV 210 nm

樣　品：人血白蛋白胰蛋白酶分解物

進(jìn)樣量：2 μL

粒徑5 μm的MGIII填料粒子周圍的液體組成變化和細(xì)孔內(nèi)的液體置換之間出現(xiàn)延遲，因此出現(xiàn)了峰形變差的現(xiàn)象；

與此相對，粒徑2 μm的IF柱的分析結(jié)果與40分鐘結(jié)果相比，雖然分離度有所降低，但比5 μm柱所得峰形更尖銳，這就是填料內(nèi)部液體置換迅速所帶來的好處。