氨基酸
氨基酸作為構成人體的蛋白質的基本單元,同時也是生物機體所需要的重要營養(yǎng)素。它們在機體內(nèi)具有各自*的營養(yǎng)功能,在代謝過程中又密切,共同參加、推動和調節(jié)生命活動。氨基酸分子中含有氨基和羧基及其他取代基團,因此氨基酸分子為極性水溶性分子,在反相色譜柱上保留較弱,無法直接進行分析。
常用的分析方法有離子交換分離后直接或間接分析,但操作復雜,部分氨基酸無法分離導致結果準確度差,或者將氨基酸衍生后采用反相色譜法分離與紫外或熒光聯(lián)合分析,方法簡單,但檢測靈敏度受衍生過程控制,且樣品基質對分離效果影響較大。
石墨化碳柱(PGC)為新型的色譜柱填料,由于其具有特異的保留機理,可用于分離在反相色譜柱上無法保留的極性化合物,如氨基酸、碳水化合物等。本實驗采用石墨化碳柱直接分離氨基酸,采用蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)進行定量分析來測定氨基酸的含量。
色譜條件:
色譜柱:Hypercarb 2.1×100mm,5 μm
(貨號:35005-102130)
流動相:A:20mM 九氟戊酸(NFPA)(水溶液);B:CAN
流速:0.2mL/min
檢測器:ELSD(55℃,2.2Bar)
柱溫:10℃
結論
采用石墨化碳黑(PGC)色譜柱和ELSD檢測器無需衍生化操作即可直接分析22種氨基酸。