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AlphaLISA表觀遺傳學(xué)試劑選購(gòu)
AlphaLISA表觀遺傳學(xué)試劑是由Alpha技術(shù)所延伸出來(lái)的便利產(chǎn)品，可適用于偵測(cè)Peptide或Full-length型式的Histone蛋白。具有高度專一性，可藉由偵測(cè)各種后轉(zhuǎn)譯修飾類型的Histone蛋白，定量組蛋白密碼(histone code)調(diào)控者(例如Acetyltransferase, Methyltransferase, Deacetylase, Demethylase)的酵素活性。與ELISA產(chǎn)品相比，AlphaLISA偵測(cè)試劑具有更加寬廣的偵測(cè)區(qū)間，可減少樣品稀釋比例的測(cè)試步驟；并且具有更精簡(jiǎn)快速的實(shí)驗(yàn)流程，讓研究者能夠更快取得定量結(jié)果。
AlphaLISA表觀遺傳學(xué)試劑作用原理：
AlphaLISA 偵測(cè)技術(shù)是由兩種核心物質(zhì)所組成，一為Donor bead，另一為Acceptor bead。Donor bead 本身身帶有光敏感物質(zhì)"Phthalocyanine"，因此當(dāng)以680 nm 雷射光激發(fā)Donor bead 時(shí)，此光敏感物質(zhì)可催化周遭的氧分子形成活化態(tài)，并于作用范圍內(nèi)激發(fā)鄰近的Acceptor bead 產(chǎn)生化學(xué)冷光反應(yīng)，此冷光能量會(huì)進(jìn)一步轉(zhuǎn)移至Acceptor bead 本身所帶有的螢光物質(zhì)，使其終產(chǎn)生615 nm 螢光訊號(hào)。與其他偵測(cè)平臺(tái)相比(例如FRET、TR-FRET)，AlphaLISA 技術(shù)的能量轉(zhuǎn)移有效距離長(zhǎng)達(dá)200 nm，因此不論是勝肽、重組蛋白、或是細(xì)胞內(nèi)原始含有的蛋白質(zhì)，皆可作為實(shí)驗(yàn)偵測(cè)對(duì)象。具有專一性佳、靈敏度高、偵測(cè)區(qū)間廣泛以及流程簡(jiǎn)單等多項(xiàng)優(yōu)質(zhì)特點(diǎn)。
在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，研究者僅需自行準(zhǔn)備(1). 待測(cè)酵素與輔因子(cofactor)、(2). 鍵結(jié)有Biotin 的Histone peptide substrate (或Histone 全長(zhǎng)蛋白)，即可開(kāi)始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。此兩項(xiàng)所需試劑在產(chǎn)品應(yīng)用文件中皆有詳盡的建議資訊，因此研究者可安心參照選購(gòu)。
AlphaLISA anti-histone H3 K9me2 antibody Acceptor beads的專一性測(cè)試結(jié)果證實(shí)此試劑的確能夠?qū)Ｒ恍缘乇孀R(shí)偵測(cè)H3K9me2 biotinylated peptide，并且無(wú)論是H3K9me1 peptides、H3K9me3 peptides、methylated H3K4 peptides、unmodified H3 peptides，皆無(wú)法干擾反應(yīng)產(chǎn)生偽陽(yáng)性結(jié)果。
所有Alpha系列的Histone modification偵測(cè)試劑，皆實(shí)際使用特定酵素進(jìn)行完整測(cè)試，具有詳盡的測(cè)試條件與實(shí)驗(yàn)流程可供參照。使用G9a Histone H3-Lysine N-methyltransferase所進(jìn)行的酵素用量和時(shí)間反應(yīng)測(cè)試結(jié)果，受測(cè)產(chǎn)品為Anti-methyl-Histone H3 Lysine 9 (H3K9me2) AlphaLISA® Acceptor Beads (需同時(shí)搭配Alpha Streptavidin Donor beads等產(chǎn)品使用)。其他測(cè)試項(xiàng)目包含：Cofactor titration (ex, SAM)、Enzyme inhibition、Z'-factor determination.
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