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蛋白層析純化系統(tǒng)選擇和使用的一些說明

閱讀：848      發(fā)布時(shí)間：2022-7-25
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　　蛋白層析純化系統(tǒng)集凝膠過濾、分配層析和吸附層析于一體，適合于親脂性小分子化合物的純化，能將結(jié)構(gòu)性能非常相近的有機(jī)物進(jìn)行分離，尤其適合中草藥中具有生理活性有效成分的分離。
　　蛋白層析純化系統(tǒng)的選擇及使用：
　　針對實(shí)驗(yàn)室級別的蛋白純化層析系統(tǒng)進(jìn)行介紹，蛋白純化層析系統(tǒng)為模板，對蛋白純化層析系統(tǒng)的硬件及軟件部分，例如系統(tǒng)泵、buffer選擇閥、收集系統(tǒng)、檢測器、柱前柱后壓等如何選擇及工作原理進(jìn)行詳細(xì)的講解。
　　1、蛋白純化層析系統(tǒng)與HPLC的區(qū)別。
　　2、硬件各部分的選擇。
　　3、定量環(huán)、定量杯的安裝及使用，定量環(huán)、定量杯、系統(tǒng)泵、樣品泵上樣的優(yōu)點(diǎn)。
　　4、系統(tǒng)中壓力產(chǎn)生的原因，如何保護(hù)層析柱。
　　5、延遲體積對峰型及收集的影響。
　　蛋白層析純化系統(tǒng)的操作步驟：
　　1.打開電腦，進(jìn)入AKTA系統(tǒng)。
　　2.打開AKTA電源，連接系統(tǒng)。
　　3進(jìn)入U(xiǎn)niCorn系統(tǒng)。
　　4.用水洗A泵。
　　5.設(shè)置層析柱的壓力上限及適當(dāng)?shù)牧魉佟?/div>
　　6.將Superdex200TM層析柱或Superdex75TM層析柱與FPLC連接。
　　7.用至少1個(gè)柱體積的水沖洗層析柱。
　　8.用至少1個(gè)柱體積的緩沖溶液平衡層析柱。
　　9.將準(zhǔn)備好的樣品于4℃，12000rpm離心10-20min。
　　10.在Load狀態(tài)下通過上樣環(huán)上樣。
　　11.在Inject狀態(tài)下樣品進(jìn)入系統(tǒng)，并在2mL時(shí)調(diào)回Load狀態(tài)。
　　緩沖液（流動(dòng)相）和樣品流過柱子，分子進(jìn)入不同的材料孔中。小一些的分子移動(dòng)的距離更。

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