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潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動物真核細胞。
大腸桿菌( Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶,將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物,從而起到解毒作用。針對這一原理,潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記,用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外,由于作用模式的差異,常與G418 (Cat:G8161),Zeocin(Cat:Z8020)和Blasticidin S(Cat:B9300)聯(lián)合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑,因其選擇性滲透進入病毒感染增強通透性的細胞,且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
潮霉素B的應(yīng)用
1.篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph 載體的原核細胞或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞);
2.由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™和blasticidin S聯(lián)合使用,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個不同載體的細胞株;
3.抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進入病毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑制翻譯的功效;
4.作為驅(qū)蟲藥加入動物飼料;
5.雙抗性穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選的抗生素作用機制及抗性
6.抗生素抗性機制抗性基因哺乳動物篩選濃度
i.潮霉素B干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀Hph 200~500μg/mL;
ii.G418干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成Tn5/Tn60 1100~1000μg/mL;
iii.Zeocin摻入或者切割DNA引起細胞死亡Sh ble 50~100μg/mL;
iv.blasticidin S核糖體上抑制肽鍵形成Bsd/BSD 3~50μg/mL。
7.羅氏潮霉素B應(yīng)用濃度
潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化。使用濃度為50-1000 μg/mL,優(yōu)濃度需要殺滅曲線來確定。
i.哺乳動物細胞·200-500 μg/mL;
ii.細菌/植物細胞·100-300 μg/mL;
iii.真菌·300-1000μg/mL。
注意事項
1) 潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了來自E. Coli.之外,還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2) 本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請小心操作。
3) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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