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南京信帆生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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丙二醛(MDA)試劑盒太啦!

時(shí)間:2017/9/6閱讀:1283
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丙二醛(MDA)試劑盒基本信息

丙二醛(MDA)是常用的膜脂過(guò)氧化指標(biāo),在酸性和高溫度條件下,可以與硫代酸(TBA)反應(yīng)生成紅棕色的*川(3,5,5—*基惡唑-2,4。二酮),其zui大吸收波長(zhǎng)在532nm。但是測(cè)定植物組織中MDA時(shí)受多種物質(zhì)的干擾,其中zui主要的是可溶性糖,糖與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物的zui大吸收波長(zhǎng)在450nm,但532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時(shí)可溶性糖增加,因此測(cè)定植物組織中MDA—TBA反應(yīng)物質(zhì)含量時(shí)一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應(yīng)物在532、450nm處的消光度值,所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應(yīng)中需一定量的鐵離子,通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug·g-1,根據(jù)植物樣品量和提取液的體積,加入Fe3+的終濃度為0.5umol·L-1。

丙二醛(MDA)試劑盒檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)介

雙抗體夾心法

  1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

  3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

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