細胞培養(yǎng)常見問題解答
閱讀:1192 發(fā)布時間:2017-9-14
1為什么要在溶解的一周內使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液?
答:胰蛋白酶在4℃就可能開始降解,如果在室溫下放置超過30分鐘,就會變得不穩(wěn)定。
2怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養(yǎng)條件?
答:ATCC(AmericanTypeCultureCollection)收集了絕大多數(shù)細胞的詳細資料。打開ATCC網(wǎng)頁的Cellsandhybridomas鏈接,輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數(shù)據(jù)庫。數(shù)據(jù)庫中有每一種細胞的詳細描述,包括細胞的來源,培養(yǎng)和凍存條件,以及相關文獻等資料。
3支原體(mycoplasma)污染的細胞,是否能以肉眼觀察出異狀?
答:不能。除極有經(jīng)驗之專家外,大多數(shù)遭受支原體污染的細胞株,無法以其外觀分辨之。
4細胞的滲透壓耐受性是多少?
答:細胞必須生活在等滲環(huán)境中,大多數(shù)培養(yǎng)細胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg,可視為培養(yǎng)人體細胞的理想滲透壓。鼠細胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對于大多數(shù)哺乳動物細胞,滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍都適宜。
5培養(yǎng)細胞出現(xiàn)死亡其可能的原因有什么?解決辦法有哪些?
答:可能的原因有培養(yǎng)箱內無CO2;培養(yǎng)箱內溫度波動太大;細胞凍存或復蘇過程中損傷;培養(yǎng)液滲透壓不正確;培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積等。
解決辦法可以檢測培養(yǎng)箱內CO2濃度,檢查培養(yǎng)箱內溫度;取新的保存細胞種;檢測培養(yǎng)液滲透壓等;換入新鮮培養(yǎng)液等。
6如何消除組織培養(yǎng)的污染?
答:當重要的培養(yǎng)細胞污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。
1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。
2)分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0mg/ml。
3)每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。
4)確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2-3代。
5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。
6)重復步驟4。
7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,確定污染是否以已被消除。