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產(chǎn)品應(yīng)用  WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=2μg/Test IF=1:100-500 石蠟切片需做抗原修復(fù)）

not yet tested inother applications.

optimaldilutions/concentrations should be determined by the end user.

別 名  Autoantigen RO; CALR; CALR protein; CALR_HUMAN; cC1qR; CRP55; CRTC; Endoplasmic reticulum resident protein 60; ERp60; grp60; HACBP; RO; Sicca syndrome antigen A; SSA.

一、 免疫動物選擇

根據(jù)需要產(chǎn)生目標(biāo)抗原的免疫反應(yīng)，選擇合適的免疫動物。例如，小鼠是免疫動物之一，因其易于操作且在免疫應(yīng)答方面較為強大。

二、抗原免疫

將目標(biāo)抗原注射到免疫動物體內(nèi)，通常需要多次免疫以激發(fā)免疫反應(yīng)?？梢赃x擇不同的免疫路線，如皮下、腹腔、靜脈等。

三 、細(xì)胞融合

從免疫動物獲得脾細(xì)胞或淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞或其他癌細(xì)胞（如SP2/0、NS0等）融合，形成雜交瘤細(xì)胞。融合細(xì)胞通常使用（PEG）或電穿孔等方法促進(jìn)細(xì)胞融合。

四、 雜交瘤細(xì)胞篩選

對融合細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般使用HAT選擇性培養(yǎng)基，通過對非雜交瘤細(xì)胞和單克隆雜交瘤細(xì)胞的抗代選擇，篩選出產(chǎn)生目標(biāo)抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞。

五、 單克隆抗體生產(chǎn)

從篩選出的單克隆雜交瘤細(xì)胞中獲取單一細(xì)胞系，并進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)和產(chǎn)生抗體。一般可采用體外或體內(nèi)方式生產(chǎn)單克隆抗體。

六、抗體純化

通過不同的方法對產(chǎn)生的單克隆抗體進(jìn)行純化，去除雜質(zhì)，例如使用蛋白A/G層析、蛋白L層析、蛋白G層析等。

七、 鑒定和驗證

對純化后的單克隆抗體進(jìn)行鑒定和驗證，例如使用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）、免疫印跡（Western blotting）等方法，確定其免疫特異性和活性。

八、應(yīng)用

將制備好的單克隆抗體應(yīng)用于具體的研究、診斷或治療等領(lǐng)域，例如免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)、免疫疫治療等。

一抗可用于檢測糖尿病、癌癥、阿爾茨海默病和帕金森病的生物標(biāo)志物。二抗則主要用于檢測和純化抗原蛋白。

二抗在標(biāo)記和檢測方面比較靈敏和靈活。所以，它們在流式細(xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡和細(xì)胞成像等一系列應(yīng)用中用于一抗的比色、化學(xué)發(fā)光和熒光檢測。二抗類型的選擇基于一抗的類別：免疫球蛋白 IgG 或 IgM、標(biāo)簽類型和來源宿主。

由于大多數(shù)一抗是使用少數(shù)宿主物種開發(fā)的，并且大多數(shù)一抗屬于 IgG 類，因此制造商通常提供可用于許多不同檢測程序和系統(tǒng)的即用型二抗。常用的二抗有抗兔 IgG、抗小鼠 IgG、抗雞 IgG 或抗山羊 IgG。所選擇的二抗應(yīng)始終能夠識別產(chǎn)生一抗的宿主物種，例如，為了檢測從小鼠產(chǎn)生的一抗，使用抗小鼠二抗。在 ELISA 和蛋白質(zhì)印跡中，標(biāo)記通常是化學(xué)發(fā)光、比色或基于熒光的，但在流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光中，僅使用熒光標(biāo)記。