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振蕩燒瓶試驗(yàn)
1 原 理
在液體中通過快速長(zhǎng)時(shí)間振蕩， 增加微生物與抗（抑）菌產(chǎn)品內(nèi)抑菌劑的接觸以顯示其抑菌作用。試驗(yàn)根據(jù)抑菌率大小判斷其是否具有抑菌能力。本試驗(yàn)適用于對(duì)非溶出性抗（抑）菌織物的抗（抑）菌效果鑒定。
2 實(shí)驗(yàn)器材
（1）實(shí)驗(yàn)菌株 金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、大腸桿菌（8099）、白色念珠菌（ATCC 10231） 菌懸液的制備方法見2.1.2。根據(jù)抑菌劑特定用途也可用其他菌懸液
（2）磷酸鹽緩沖液（PBS，0.03mol/L，pH值7.2）
（3）振蕩搖床 （300r/min）
（4）三角燒瓶
（5）營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）與沙堡瓊脂培養(yǎng)基
3 操作程序
（1）將抗菌物品剪切成 10mm×10mm 樣片，稱取 0.75g 2份分別置入 250mL 的三角燒瓶中。
（2）在上述三角燒瓶中加入 70mL PBS和 5mL菌懸液，使菌懸液在PBS中的濃度為1×104cfu/mL～5×104cfu/mL。
（3）將三角燒瓶固定于振蕩搖床上，在作用溫度為 20℃～25℃ 的條件下，以300r/min分別振搖 2min、1h。吸取 1.0mL 用PBS作適當(dāng)稀釋至10-2，作為試驗(yàn)組振蕩前樣液。
（4）分別吸取振蕩前和振蕩后樣液及適當(dāng)稀釋度的稀釋液各 1.0mL，以瓊脂傾注法接種平皿，每個(gè)樣液接種2個(gè)平皿，按照2.1.3規(guī)定的方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
（5）試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照樣片和不加樣片組。對(duì)照樣片組以不含抗菌劑的材質(zhì)、大小相同的樣片代替抗菌樣片外， 其它操作程序均與實(shí)驗(yàn)組相同。 不加樣片組分別取 5mL菌懸液和 70mL PBS加入 250mL 三角燒瓶中，混勻，分別于振蕩前和振蕩后 1h，各取 1.0mL 菌懸液與PBS的混合液做適當(dāng)稀釋。同上，按2.1.3法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
（6）以試驗(yàn)同批次的稀釋液、培養(yǎng)基分別設(shè)陰性對(duì)照。
（7）試驗(yàn)重復(fù)3次，按下式計(jì)算抑菌率
抑菌率=（樣品振蕩前平均菌落數(shù)-樣品振蕩后平均菌落數(shù)）/樣品振蕩前平均菌落數(shù)×100%
4 評(píng)價(jià)規(guī)定
（1）各次試驗(yàn)陰性對(duì)照均應(yīng)無菌生長(zhǎng)。
（2）不加樣片組活菌計(jì)數(shù)在 1×104cfu/mL～5×104cfu/mL之間， 且樣本振蕩前后平均菌落數(shù)差值在 10% 以內(nèi)， 試驗(yàn)有效。
（3）各次試驗(yàn)中，試驗(yàn)樣片抑菌率與對(duì)照樣片抑菌率的差值菌＞26%， 即判定該產(chǎn)品具有抗菌作用。
5 注意事項(xiàng)
振蕩前須將振蕩搖床上的三角燒瓶固定牢，以免碰破。
試驗(yàn)中，在實(shí)驗(yàn)誤差允許的范圍內(nèi)，如果試驗(yàn)組和對(duì)照組出現(xiàn)振蕩后菌落數(shù)高于振蕩前 菌落數(shù)的情況，其抑菌率可按“0”計(jì)算。