在塑料生物可降解性評估體系中，或以國際標準EN 13432為代表的認證體系中，陸生高等植物毒性試驗均作為評估塑料生物可降解性性能的重要測試項目之一，正逐步得到測試機構越來越多的重視。

但同時我們湖北洛克泰克儀器股份有限公司，作為多年深耕塑料生物降解設備和方法研究領域的企業(yè)，也充分了解和認識到，當前國內客戶在逐步開展該項檢測的時候，面臨了諸多的問題。特此，我們希望能盡綿薄之力，幫助大家能夠更深入的理解標準和解惑試驗當中的問題。

一、對標準的理解

針對歐盟EN 13432可降解材料認證，其中的植物毒性試驗主要依據其附錄E（Determination of ecotoxic effects to higher plants）和OECD 208（Terrestrial Plant Test: Seedling Emergence and Seedling Growth Test）。

我們在理解EN 13432的時候，要注意到這里的植物毒性試驗并不是*照搬OECD 208。OECD的測試方法主要是針對已知化學品，進行在理化性質、生態(tài)系統(tǒng)影響、環(huán)境行為影響、人體健康影響幾大方面的試驗和評價。初衷并不是用于塑料降解產物的評估，只是由于OECD 208等相關標準作為在人藥、獸藥、農藥化學品評估方面的普遍認可度，故充分參考和借鑒了OECD 208的測試原理和方法。因此，這也是很多人在閱讀理解OECD 208標準時，會覺得讀不懂、不理解的原因之一。

另外，從OECD 208的標題我們可以了解到，這個方法本意是包括兩部分試驗：幼苗萌芽試驗、幼苗生長試驗。其設計初衷是因為，需先采用一個快速短期的幼苗萌芽試驗對試驗基體（土壤）進行初步確認是否適合選定的植株種子發(fā)芽，當確認可以后再進行進一步的長期生長試驗。這是兩個獨立的試驗。

但是，很多人在閱讀了標準后，會發(fā)現標準并沒有闡述過多關于幼苗萌芽試驗的過程，而只談到了幼苗生長試驗。這使得很多人又一次陷入了不理解的狀態(tài)。

其實，幼苗萌芽試驗，需要我們回頭去閱讀EN 13432的附錄E部分，才會清楚明白試驗過程。

二、對方法的理解

    OECD 208在評估化學品對植物生長的影響時，采用的是類似于制備不同濃度梯度化學品的方式，通過選定植株在經噴灑過不同濃度化學品的土壤中生長，最終通過植株生長情況評估Ecx（Effect Concentration）或Erx（Effective Application Rate）值以及計算NOEC（No Observed Effect Concentration）和LOEC（Lowest Observed Effect Concentration）值。

    但當EN 13432參考OECD 208時，并不能*按照以上方式去進行試驗。因為，對于評估化學品，試驗對象屬于已知物質，人們可以通過配置不同已知濃度梯度進行試驗。但應用于塑料降解產物（崩解后土壤）的評估時，試驗對象是未知或者說不明確的，我們不知道塑料降解后土壤里是何種潛在的有毒物質。故按照EN 13432附錄E要求，需將參比底物（Reference Substrate）與崩解試驗后的土壤按照25%和50%兩種比例混合，模擬在兩個濃度梯度條件下進行試驗。這就是很多人在初次閱讀理解EN 13432和OECD 208兩份標準時，遇到的最大的不解之處。

三、對試驗設置的理解

    在按照EN 13432附錄E進行幼苗萌芽試驗時，大家會很快面臨一個問題，標準并未給出試驗周期呀。其實，試驗周期要根據選定的試驗植株種子類型進行制定，并不是一概而論的。另外，在選擇試驗植株種子時，也應確保區(qū)域代表性，具體可參考OECD 208中“Criteria for selection of test species”一節(jié)。

    另外，在按照OECD 208進行幼苗生長試驗時，光照強度是有一定要求的即300~400 μE/m²/s。首先，大家要注意到，這是一個不太常用的光強單位，它采用的是光量子數方式描述光照強度，主要用于園藝學領域。它與我們平時常見的單位“lux勒克斯”并沒有簡單直接的數學換算關系，因為在單位時間單位面積內通過的光量子數會受到光源的距離、色溫、波長、地理環(huán)境、氣候環(huán)境等諸多因素的影響。

    其次，需要特別注意到，OECD 208推薦的這個光強是按照“Greenhouse溫室”條件建立的，原文為“The following conditions are generally recommended for greenhouse testing”。

    陸生植物試驗：幼苗萌芽和幼苗生長試驗

試驗原理

    本方法用于評價在土壤中（或其他合適的土壤基質）施用供試品后對出苗和較高植物早期生長的影響。

    種子種入用供試品處理過土壤中，在對照組出苗率達到50%后的14到21天內進行評價。終點測量是可見的出苗率、干苗重（也可為鮮苗重），某些情況下為苗高，也要評價植物不同部位上可見的有害的影響。這些測量和觀察與未處理的對照進行比較。根據可能的暴露途徑，供試品混入土壤（或可能的人工土壤基質）或噴灑在土壤表面，盡可能正確代表化學品潛在的暴露途徑。土壤混合時先進行大量散土的混合，然后再裝入盆中，將所選植物種類種子種入土壤中。表面施藥時，先將土壤裝入盆中，將種子種好，然后再噴藥。試驗體（對照和處理土壤及種子）放在適合植物生長的環(huán)境中。本試驗可根據研究目的測定劑量－反應曲線，或單劑量／比率作為限度試驗。如果單劑量／比率試驗超出一定的毒性水平（例如觀察到的效應高于X%)，要進行范圍篩選試驗測定毒性高和低限，再進行多劑量試驗產生劑量－反應曲線。適當的統(tǒng)計分析方法分析獲得最敏感參數的作用濃度Ecx或有效施用率Erx(如C25,ER25,EC50,ER50)。同樣無作用濃度（NOEC)和zuidi作用濃度（LOEC)也能計算出來。

試驗的有效性性

    為保證試驗的有效性，對照組必須滿足以下條件：出苗率應不少于70%;幼苗沒有可見的植物毒素影響（如變色病、壞死病、枯萎、葉子和莖的畸形），個別種類的植株在生長和形態(tài)上只有正常變異；試驗期間，對照組幼苗平均存活率應高于90%；特定品種的生長環(huán)境條件應保持一致，同時其生長介質中應含有等量的人工土壤基質、支持介質或同樣來源的基質。

    作為中國科學測試儀器研究型制造商，湖北洛克泰克儀器股份有限公司為客戶提供專業(yè)的科學測試儀器、測試方法、培訓及技術服務。在生物降解測試領域，湖北洛克泰克儀器股份儀器有限公司提供生物降解測試儀器全方案，包括CMA、CNAS、Rheinland等認證所需生物降解測試儀器等。

    洛克泰克公司秉承“技術推動科學進步”的使命，致力于我國的“碳達峰、碳中和”目標，為政府、大學、研究機構及企業(yè)提供服務，實現更健康、更安全、更環(huán)保的高質量發(fā)展。

湖北洛克泰克儀器股份有限公司成立于2013年，是優(yōu)良企業(yè)，擁有包括生物降解領域的近30余項證書。為中國農業(yè)大學厭氧發(fā)酵聯合實驗室、華中農業(yè)大學產學研合作基地。