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北京長恒榮創(chuàng)科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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使用熒光顯微鏡細(xì)胞觀察具體操作步驟

時(shí)間:2024/12/6閱讀:236
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使用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞的具體操作步驟如下:


一、準(zhǔn)備工作

開啟熒光顯微鏡:在白天使用熒光顯微鏡時(shí),應(yīng)用窗簾遮蔽外界光線。如果是夜間,則關(guān)閉房內(nèi)光源。然后除去熒光顯微鏡的防塵罩,裝上汞燈(或其他適用的光源),插上電源并打開燈源,預(yù)熱15~30分鐘使光源達(dá)到最亮和穩(wěn)定狀態(tài)。

檢查顯微鏡部件:確保目鏡、物鏡、濾光片等部件完好無損,并處于良好狀態(tài)。

準(zhǔn)備樣本:確保熒光染料標(biāo)記的細(xì)胞樣本已經(jīng)經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚砗凸潭ǎ员阍陲@微鏡下觀察。樣本應(yīng)放置在載玻片上,并用適當(dāng)?shù)膴A具固定好,以防止觀察過程中樣本移動(dòng)。


二、調(diào)節(jié)顯微鏡

放置樣本:將載玻片放置在熒光顯微鏡的載物臺(tái)上,并壓緊載玻片。然后上升載物臺(tái),調(diào)節(jié)載物臺(tái)調(diào)整按鈕,使樣本位于顯微鏡的物鏡下方,并大致位于視野中央。

選擇物鏡:按照先低倍再高倍的原則選擇物鏡。先使用低倍鏡找到樣本的視野,然后逐漸切換到高倍鏡以獲得更清晰的圖像。

調(diào)節(jié)焦距:通過調(diào)節(jié)熒光顯微鏡右下方的旋鈕來調(diào)整光源亮度,同時(shí)調(diào)節(jié)“粗調(diào)"與“微調(diào)"旋鈕來矯正畫面的清晰度。


三、觀察與記錄

選擇濾光片:根據(jù)熒光染料的發(fā)射波長來選擇合適的濾光片,以過濾掉激發(fā)光和其他雜散光,只保留熒光信號(hào)。

打開熒光光閘:調(diào)節(jié)曝光時(shí)間,打開熒光光閘,開始對(duì)樣品進(jìn)行觀察。

觀察樣本:通過目鏡觀察樣本,進(jìn)一步調(diào)整焦距和光源強(qiáng)度以獲得最佳的圖像效果??梢郧袚Q不同的濾光片來觀察不同波長的熒光信號(hào),以便更全面地了解樣本的結(jié)構(gòu)和分布。

拍照記錄:將濾光片撤回,打開圖像采集系統(tǒng)(如IPP系統(tǒng)),將觀察到的圖像記錄下來。選擇照片保存路徑并重命名,以免覆蓋之前的照片。拍照后關(guān)閉圖像采集系統(tǒng)與電腦。


四、結(jié)束工作

關(guān)閉汞燈:在觀察結(jié)束后,及時(shí)關(guān)閉汞燈。注意汞燈的工作時(shí)間應(yīng)在半小時(shí)到兩個(gè)小時(shí)之間,汞燈關(guān)閉半小時(shí)后方可再次啟動(dòng)。

收拾顯微鏡:向下輕壓載物臺(tái)將其鎖在低處,取下載玻片。使用空物鏡朝下,關(guān)閉熒光顯微鏡的電源,并將顯微鏡用防塵罩蓋好。


五、注意事項(xiàng)

操作規(guī)范:嚴(yán)格按照說明書使用熒光顯微鏡,不要隨意操作。使用前后要登記儀器狀況。初次使用應(yīng)在熟悉操作流程的人員指導(dǎo)下進(jìn)行。

暗室環(huán)境:使用熒光顯微鏡時(shí)應(yīng)在暗室環(huán)境,觀察標(biāo)本時(shí)要確認(rèn)眼睛適應(yīng)暗室再進(jìn)行觀察。

護(hù)目鏡保護(hù):觀察樣本時(shí)要戴上護(hù)目鏡,防止紫外線刺傷眼睛。

油鏡使用:使用油鏡時(shí)要注意操作規(guī)范,避免油滴到載物臺(tái)或其他鏡頭上,使用后要用二甲苯擦拭鏡頭。

光源壽命:熒光顯微鏡的光源使用壽命有限,應(yīng)集中觀察避免頻繁啟動(dòng)影響使用壽命。室內(nèi)溫度高時(shí)應(yīng)對(duì)顯微鏡加電扇降溫。

燈泡管理:新更換的燈泡要記錄使用時(shí)間,避免一天中對(duì)燈泡頻繁啟動(dòng)。

樣本保存:標(biāo)本染色后要立即觀察,時(shí)間久了熒光會(huì)減弱。如果需要放置后檢查,應(yīng)用聚乙烯塑料袋保存染色樣本。


遵循以上步驟和注意事項(xiàng),可以有效地使用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞樣本并獲得清晰的熒光圖像。



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