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如何快速啟動siRNA文庫篩選

閱讀:400        發(fā)布時間:2023-1-31

客戶:小刀,我之前有聽過你的siRNA文庫講座,還挺感興趣的
客戶:但是我們實驗室沒有高通量儀器,也可以做siRNA文庫篩選嗎?會不會太麻煩?
DAO:不會很麻煩,小幾十個基因的篩選排槍就能搞定,高通量儀器一般適用于幾百、幾千或幾萬個基因的篩選


客戶:之前沒做過siRNA篩選,我有點怕我操作不好
DAO:這個不用太擔(dān)心,基本的轉(zhuǎn)染操作和單基因一致,只不過通常是用96孔細胞板進行,所以需要多些細心和耐心


客戶:好的,那我可以試試看
客戶:對了,你講座中提到的成品文庫,我看了下,這些基因家族分類和我想要研究的方向不能夠完mei匹配呢
DAO:你說的是這些亞庫嘛?
 
DAO:這個問題不大,圖中所有文庫的基因列表我都有,你可以看看你的研究方向和哪套庫靠的上,然后挑選自己喜歡的基因進行定制。又或者你自己有想要研究的一些基因,可以直接發(fā)我,畢竟只要有5個基因就能定制文庫了,價格還劃算


客戶:能定制還蠻不錯的,那我來看看能不能湊些基因出來給你
客戶:但是定制的規(guī)格、產(chǎn)品形式又是什么樣的?是不是和成品不一樣啊?
DAO:基本是一樣的,但是定制更靈活:規(guī)格上有0.1, 0.25, 0.5, 1, 2 nmol 5種可選,siRNA你可以選擇4條分裝的,也可以選擇SMARTpool形式的


客戶:等等等,什么叫4條分裝,SMARTpool又是什么?
DAO:哈哈,講座沒認真聽吧,是這樣的,每個基因我們會提供4條不同的siRNA,4條分裝就是每條siRNA單獨放1個孔里,那SMARTpool就是把4條siRNA預(yù)混后共同放在1個孔里


客戶:那我要怎么選啊?哪種更合適呢?
DAO:做多個基因篩選的話,我是更建議選SMARTpool的,這樣你的轉(zhuǎn)染工作量就減少了3/4,而且SMARTpool沉默效果更好,畢竟4條不同的siRNA共同發(fā)揮作用,大哥不行還有二哥、三哥和四哥呢


客戶:那沉默效率怎樣?有沒有做過驗證啊?萬一效果不好怎么辦?
DAO:這個可以放心,所有的siRNA出廠前都有做過驗證,而且是有沉默效率保障的,保證每個基因?qū)?yīng)的4條siRNA中至少有3條在mRNA水平上有≥75%的沉默效率,如果效果不好,提供陰陽性對照、siRNA的qPCR數(shù)據(jù),廠家是會賠付的


客戶:OKK,那這個規(guī)格我咋選呢,我是想買個0.1nmol的,但是具體能做幾次篩選我有點慌?
DAO:和我想到一起去了,如果只是利用文庫做一下基因的初篩,那0.1nmol就很夠用了
DAO:關(guān)于能做幾次篩選,這個取決于你最終轉(zhuǎn)染時siRNA的使用終濃度了。以96孔板篩選,25nM終濃度,每個基因3個復(fù)孔為例,大概可以支持個10次篩選左右


客戶:這樣啊,那0.1nmol確實夠用了,篩到以后,我再單獨購買大規(guī)格的siRNA就是了,沒必要篩選的時候就買那么多,不劃算
DAO:對的,就是這個意思


客戶:行,那我了解了,我現(xiàn)在就去找找基因去,你把泛素化集合相關(guān)的基因列表發(fā)我,我看看選一些,再把我手頭上有的基因列一列,到時發(fā)你
DAO:好噠,這是基因列表,請查收
 
客戶:謝謝

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