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外泌體 & miRNA完整解決方案
細(xì)胞外囊泡 (extracellular visicles，EV) 是由細(xì)胞釋放出的攜帶并保護(hù)細(xì)胞來(lái)源生物信息分子物質(zhì)的特殊結(jié)構(gòu)，可通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)核酸和蛋白質(zhì)等生物信息物質(zhì)參與體內(nèi)靶細(xì)胞的信號(hào)調(diào)節(jié)，并作為藥物或疫苗的載體在抗腫瘤治療、干細(xì)胞治療等領(lǐng)域發(fā)揮關(guān)鍵作用，而其中EV中的RNA分子 (exoRNA) 因其*的表達(dá)模式而受到了廣泛的關(guān)注。
一、外泌體及miRNA純化
① 外泌體純化
沉淀法miRCURY®外泌體純化試劑盒 暢銷(xiāo)
※ 從不同起始材料中進(jìn)行外泌體提?。耗蛞簶颖?-10 mL，CSF樣本1 mL，細(xì)胞培養(yǎng)液 1-10 mL ；血漿/血清0.2-1.4mL
※ 2小時(shí)內(nèi)完成外泌體提取
※ 無(wú)需高速離心及酚/氯仿提取
※ 適用于多種應(yīng)用，如miRNA或RNA profiling
訂購(gòu)信息
| 產(chǎn)品 | 說(shuō)明 | 貨號(hào) |
| miRCURY Exosome Serum/Plasma Kit | 沉淀法，從血清或血漿中提取外泌體及其他胞外囊泡 | 76603 |
| miRCURY Exosome Cell/Urine/CSF Kit | 沉淀法，從細(xì)胞培養(yǎng)上清液，尿液及CSF中提取外泌體及其他胞外囊泡 | 76743 |
親和柱膜法外泌體分離及外泌體內(nèi)RNA(含miRNA)的純化
exoEasy Maxi Kit 貨號(hào)：76064
從血漿、血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物液體中分離完整的exosome及其他細(xì)胞外囊泡
※ 適用于囊泡功能性檢測(cè)及物理和生化分析
※ 可在25分鐘內(nèi)純化獲得exosome及其他細(xì)胞外囊泡
※ 離心柱純化流程，可平行處理多個(gè)樣品
※ 可處理大體積的樣品(4 ml血漿或血清，或32ml細(xì)胞培養(yǎng)上清)，靈敏檢測(cè)低豐度轉(zhuǎn)錄本
exoRNeasy Serum/Plasma Kit 暢銷(xiāo)
采用親和性膜離心柱，可從來(lái)自血清、血漿、尿液、細(xì)胞上清等樣本中分離exosome和其他細(xì)胞外微泡中高效分離RNA。該試劑盒能夠快速、便利的獲得結(jié)果，十分適用于敏感的下游應(yīng)用。
訂購(gòu)信息
| 產(chǎn)品 | 說(shuō)明 | 貨號(hào) |
| exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit (50) | 過(guò)柱法，直接從樣本里面得到外泌體里面的RNA，4ml上樣量 | 77164 |
| exoRNeasy Serum/Plasma Midi Kit (50) | 過(guò)柱法，直接從樣本里面得到外泌體里面的RNA，lml上樣量 | 77144 |
| exoRNeasy Serum/Plasma Starter Kit (20) | 過(guò)柱法，直接從樣本里面得到外泌體里面的RNA, 10個(gè)4ml+10個(gè)1ml上樣的柱子 | 77023 |
| exoEasy Maxi Kit (20) | 過(guò)柱法，非超速離心，得到純度更好沒(méi)有碎片的外泌體 | 76064 |
特殊樣本外泌體及miRNA純化試劑盒訂購(gòu)指南
| 提取方法 | 適用樣本 | 上樣量 | 貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 說(shuō)明 |
| 膜親和法 | 血漿、血清、腦脊液 | 1-4ml | 77164-Qiagen | exoRNeasy Maxi Kit (50) | 50T | 提取外泌體以及外泌體中的總RNA |
| 需要看電鏡 | 76214 | Buffer XE (45 ml) | 45ml | 洗脫囊泡的buffer | ||
| 細(xì)胞培養(yǎng)上清 | 8ml | 77144 | exoRNeasy Midi Kit (50) | 50T | 提取外泌體以及外泌體中的總RNA | |
| 最多32ml | 77164-Qiagen | exoRNeasy Maxi Kit (50) | 50T | 提取外泌體以及外泌體中的總RNA | ||
| 樣本量大于8ml | 76204 | Buffer XBP (250 ml) | 250ml | 樣本量大于8ml會(huì)不夠需購(gòu)買(mǎi) | ||
| 需要看電鏡 | 76214 | Buffer XE (45 ml) | 45ml | 洗脫囊泡的buffer | ||
| 尿液 | 4ml | 77144 | exoRNeasy Midi Kit (50) | 50T | 提取外泌體以及外泌體中的總RNA | |
| 16ml | 77164-Qiagen | exoRNeasy Maxi Kit (50) | 50T | 提取外泌體以及外泌體中的總RNA | ||
| / | 77900 | Reagent UI (1 ml) | 12 | 用于尿液樣本中short RNA的提取的去抑制劑的試劑 | ||
| / | 74204 | RNeasy MinElute Cleanup Kit (50) | 50T | 用于尿液樣本中short RNA的提取的柱子 |
② miRNA純化：Copurifcation of miRNA and total RNA
產(chǎn)品特點(diǎn)：
※ 可以單獨(dú)富集各種組織、細(xì)胞樣品中的miRNA和其他小RNAs (＞18nt)，做芯片分析時(shí)單獨(dú)分離可能會(huì)有幫助
※ 推薦同步純化包含miRNA的總RNA，這樣有助于一次cDNA合成可以獲得所有類(lèi)型RNA信息，便于同時(shí)進(jìn)行miRNA，mRNA或其他非編碼RNA檢測(cè)
※ 硅膠膜技術(shù)確保獲得最好純度miRNA，不會(huì)有Trizol方法帶來(lái)的選擇性miRNA丟失，適合各種下游檢測(cè)
miRNeasy Serum/Plasma Kit (貨號(hào)：217184)
※ 同樣使用經(jīng)典的硅膠膜法
※ 該試劑盒適用于使用檸檬酸鹽或EDTA抗凝的血清 (不能使用肝素，會(huì)干擾下游的實(shí)驗(yàn))
※ 保證清洗緩沖液的溫度在20-30°C，否則會(huì)有鹽類(lèi)的殘留
※ 配合使用Spick-in control，對(duì)純化效率及下游檢測(cè)進(jìn)行監(jiān)測(cè)
| miRNeasy Serum/Plasma Kit | |
| RNA片段選擇 | 大于18nt |
| 起始樣本量 | 200ul |
| 最小洗脫體積 | 10ul |
| RNA產(chǎn)量 | 60-150ng |
| 內(nèi)參 | C.elegans miR-39 |
miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit (貨號(hào)：217204) 暢銷(xiāo)
※ 無(wú)需Phenol裂解，更易于在QIAcube進(jìn)行自動(dòng)化操作
※ 采用UCP MinElute純化柱，更安全、更小洗脫體積
※ 純化高品質(zhì)含胞外/外泌體非編碼RNA(miRNA)的總RNA，適合任何下游應(yīng)用
miRNA純化試劑盒訂購(gòu)指南
| 樣本類(lèi)型 | 試劑盒名稱(chēng) | 試劑盒貨號(hào) | 樣品量 | 洗脫體積 | 處理 | 純化類(lèi)型 | 應(yīng)用 |
| 動(dòng)物組織或細(xì)胞 | miRNeasy Mini Kit | 217004 | 50mg（脂肪100mg）組織，1 x 10 7細(xì)胞 | 30ul | 手動(dòng)（離心或真空） | miRNA、總RNA | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray |
| miRNeasy Micro Kit | 217084 | 5mg（脂肪10mg）組織， 1 x 10 6細(xì)胞 | 10ul | ||||
| miRNeasy 96 Kit | 217061 | 50mg（脂肪100mg）組織，1 x 10 7 細(xì)胞 | Min. 2 x 45?µl | ||||
| 組織miRNA提取試劑盒 | abs60261 | 10-20mg的組織 | 30ul | 手動(dòng) | miRNA | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray | |
| 細(xì)胞miRNA提取試劑盒 | abs60262 | 1 x 10 7 細(xì)胞 | 30ul | 手動(dòng) | miRNA | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray | |
| miRNeasy Tissue/Cells Advanced Mini Kits | 217604 | 最多30 mg冷凍組織（15 mg穩(wěn)定組織）， 最多1 x 107的細(xì)胞 | 30 µl | 手動(dòng)（監(jiān)控），自動(dòng)（QIAcube連接） | miRNA, total RNA | NGS, real-time RT-PCR, microarray | |
| miRNeasy Tissue/Cells Advanced Micro kit | 217684 | 最多5mg的組織，最多1 x 106的細(xì)胞 | 默認(rèn)值為20µl，最小值為10µl | 手動(dòng)（監(jiān)控），自動(dòng)（QIAcube連接） | miRNA, total RNA | ||
| Allprep DNA/RNA/miRNA Kit | 80224 | 組織：不超過(guò)30 mg的新鮮或冷凍組織；細(xì)胞：不超過(guò)1 x 107細(xì)胞 | / | / | DNA、RNA、miRNA | / | |
| 血液樣本 | 血液miRNA提取試劑盒 | abs60260 | 160μL血液樣本 | 30 µl | 手動(dòng) | miRNA | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray |
| 外泌體 | 外泌體RNA提取試劑盒 | abs60263 | 200μL外泌體樣本 | 40 µl | 手動(dòng) | Total RNA，miRNA, | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray |
| FFPE組織切片 | miRNeasy FFPE Kit | 217504 | 最多4片，每個(gè)截面的厚度為10µm，表面積為250mm 2 | 14-30 µl | 手動(dòng)（QIAcube上的自動(dòng)處理協(xié)議可用） | miRNA, total RNA | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microArray |
| 穩(wěn)定在RNAprotect Animal Blood Tubes中的小鼠、大鼠及其它動(dòng)物的血液 穩(wěn)定并純化 | miRNeasy Protect Animal Blood System | 76544 | 100 µl or 500 µl animal blood | 14 µl | 手動(dòng)（離心） | Total RNA | Northern、雜交、RT-PCR、定量、實(shí)時(shí)RT-PCR、下一代測(cè)序、陣列分析 |
| PAXgene Tissue Container 中的組織 | PAXgene Tissue miRNA Kit | 766134 | 4 x 15 x 15 mm | 14–40 µl | 手動(dòng)（離心） | miRNA | Northern雜交分析、RT-PCR和定量、實(shí)時(shí)RT-PCR、微陣列分析 |
| 穩(wěn)定在 PAXgene Blood RNATubes 中的人血液 | PAXgene Blood miRNA Kit | 763134 | 2.5 ml | 40 µl | 手動(dòng)（離心）或在QIAcube上 | miRNA | RT-PCR和實(shí)時(shí)RT-PCR、cDNA合成、northern、dot和slot blot分析、引物延伸、微陣列分析 |
| 血清、血漿、尿液等無(wú)細(xì)胞體液 | miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit | 217204 | ≤ 200ul | / | / | 從少量血清和血漿中純化無(wú)細(xì)胞總RNA，主要是miRNA和其他小RNA | 生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、表達(dá)式分析、下一代測(cè)序、定量、實(shí)時(shí)RT-PCR、微陣列分析 |
| 血漿血清miRNA提取試劑盒 | abs60264 | ≤ 200ul | 30ul | 手動(dòng)（離心） | RT-PCR和實(shí)時(shí)RT-PCR、cDNA合成、northern、dot和slot blot分析、引物延伸、微陣列分析 | ||
| miRNeasy Serum/Plasma Kit | 217184 | ≤ 200ul | / | / | 生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn) miRNA分析 miRNA測(cè)序 miRNA分析 Northern印跡分析 微陣列分析 | ||
| exoRNeasy Kits | 77144 / 77164 / 77023 | midi規(guī)格可有效處理較小的樣本體積（最多1 ml血清/血漿或4 ml尿液），而maxi規(guī)格可使用大樣本體積（最多4 ml血清/血漿、16 ml尿液或32 ml細(xì)胞培養(yǎng)上清液） | / | 改進(jìn)了傳統(tǒng)的超速離心微囊分離方法，僅需20分鐘即可產(chǎn)生純化的細(xì)胞外囊泡 | miRNA | 轉(zhuǎn)錄組學(xué) miRNA分析 mRNA分析 RNA測(cè)序 | |
| 植物 | miRNeasy Mini kit | 217004 | 50mg（脂肪100mg）組織，1 x 107細(xì)胞 | 30 µl | 手動(dòng)（離心或真空） | miRNA, total RNA | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray |
二、miRNA定量
① miRCURY LNA miRNA qPCR檢測(cè)系統(tǒng)
Exiqon microRNA qPCR系統(tǒng)將通用逆轉(zhuǎn)錄的高靈敏度，高效率與鎖核酸修飾的定量引物的高特異性相結(jié)合，在3個(gè)小時(shí)之內(nèi)即可完成microRNA表達(dá)分析。miRCURY LNA miRNA qPCR系統(tǒng)可提供assays及panels規(guī)格，20ng total RNA無(wú)需預(yù)擴(kuò)增即可在96孔及384孔板上進(jìn)行上百microRNAs的精準(zhǔn)定量。miRCURY LNA miRNA qPCR檢測(cè)系統(tǒng)具有以下特點(diǎn)：
● 高的靈敏度：低至1pg total RNA即可進(jìn)行可靠的定量
● 高的特異性：LNA引物可精確區(qū)分只有一個(gè)堿基差異的miRNA異構(gòu)體
● 實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單方便：在3小時(shí)內(nèi)即可完成從樣本到數(shù)據(jù)分析的整個(gè)流程
miRCURY LNA RT kit （貨號(hào)：339340）
用于一鏈合成，與miRCURY LNA miRNA PCR Assays / Panels搭配使用效果佳，包含RNA spike-in模板。
miRCURY LNA miRNA PCR Assay / Custom PCR Assay / miRCURY LNA miRNA PCR Panels
200次反應(yīng)的預(yù)制或定制LNA miRNA PCR primers，用于目標(biāo)miRNA表達(dá)水平檢測(cè)。
miRCURY LNA SYBR Green PCR Kits（貨號(hào)：339345、339346、339347）
用于qPCR檢測(cè)，包含ROX染料。
miRCURY LNA miRNA PCR Starter Kit（貨號(hào)：339320） 爆品
包含該套件包括UniSp6模板及引物，一個(gè)候選內(nèi)源對(duì)照引物組（miR-103a-3p）和兩個(gè)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的引物組（人、大鼠、小鼠），并通過(guò)LNA技術(shù)進(jìn)行了增強(qiáng)。這些試劑能夠定量分析多達(dá)20個(gè)樣品。
訂購(gòu)信息
| 產(chǎn)品 | 說(shuō)明 | 貨號(hào) |
| miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit | 2X miRCURY SYBR Green Master Mix, RNase-Free Water | 339345 |
| 339346 | ||
| 339347 | ||
| RNA Spike-In Kit, ForRT | 包含 UniSp2、UniSp4、和 UniSp5 RNA 內(nèi)參模板混合物及 cel-miR-39-3p RNA內(nèi)參模板 | 339390 |
| miRCURY LNA RT Kit | 包含 8-64 cDNA 合成反應(yīng)：5x RT Reaction Buffer, 10x RT Enzyme Mix, UniSp6, RNA 內(nèi)參模板,RNase-Free Water | 339340 |
| miRCURY LNA miRNA PCR Assay | 200 次反應(yīng)的 LNA miRNA PCR primers | 339306 |
| miRCURY LNA miRNA Custom PCR Assay | 200 次反應(yīng)的定制 LNA miRNAPCR primers | 339317 |
| miRCURY LNA miRNA PCR Starter Kit | 2個(gè)可選的miRCURY LNA PCR Assay，spike-in templete & assay ，內(nèi)參 assay及20次逆轉(zhuǎn)錄，100次PCR所用的試劑 | 339320 |
| miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assay (200) | 200 次探針?lè)ǚ磻?yīng)的 LNA miRNA PCR primers | 339350 |
| miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays | 200 次反應(yīng)的定制探針?lè)?nbsp;LNA miRNA PCR primers | 339351 |
| miRCURY LNA Probe PCR Kit (200) | 2X QuantiNova Probe Master Mix, 10X miRCURY Probe Univ. Primer, Rox Reference Dye, RNase-Free Water | 339371 |
| 339372 | ||
| 339373 |
圖1：PolyA尾添加到成熟的miRNA模板中（步驟1A）。使用帶有3' degenerate anchor及5' universal tag的PolyT primer進(jìn)行cDNA合成（步驟1B）。用一對(duì)microRNA特異性LNA primer對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增（步驟2A），使用SYBR® Green或probe進(jìn)行檢測(cè)（步驟2B）。
圖2：低至1pg total RNA 即可進(jìn)行精準(zhǔn)定量。人 AM6000 total RNA梯度稀釋后進(jìn)行定量，所有的microRNA assay均顯示出線(xiàn)性相關(guān)R2＞0.99。
② 愛(ài)必信miRNA定量分析系列產(chǎn)品
miRNA加尾法和探針?lè)孓D(zhuǎn)錄試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)：
● 基因工程優(yōu)化的Poly A聚合酶，miRNA Poly A聚合高效快速；
● 特別設(shè)計(jì)的含Oligo d(T)的引物，能夠與miRNA Poly A+高效結(jié)合，RT效率高于多家同類(lèi)試劑；
● 一次逆轉(zhuǎn)錄可獲得多個(gè)miRNA的RT產(chǎn)物，后續(xù)可進(jìn)行多個(gè)miRNA的檢測(cè)，極大節(jié)省樣本用量；
● 可配套 miRNA加尾染料法熒光定量PCR試劑或者iRNA探針?lè)晒舛縋CR試劑使用，輕松獲得優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并可免費(fèi)獲得配套的下游引物。
miRNA莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)：
● 高效的基因工程優(yōu)化的逆轉(zhuǎn)錄酶，可大幅提升miRNA RT反應(yīng)的效率；
● 特別設(shè)計(jì)的莖環(huán)引物可高效、特異性地反轉(zhuǎn)錄目的miRNA，獲得加長(zhǎng)的miRNA cDNA，不僅可用于染料法qPCR, 也可用于探針?lè)╭PCR；
● 搭配 miRNA莖環(huán)染料法熒光定量PCR試劑盒，可獲得優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并可免費(fèi)獲得莖環(huán)引物和上下游引物的設(shè)計(jì)和序列信息。
miRNA系列產(chǎn)品
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 應(yīng)用 |
| abs60265 | miRNA加尾法逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 | 20T40T | miRNA加尾逆轉(zhuǎn)錄試劑，可配套 miRNA加尾染料法熒光定量PCR試劑使用 |
| abs60266 | miRNA加尾法逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（血漿） | 25T50T | miRNA加尾逆轉(zhuǎn)錄試劑；特別適用于血漿、血清等miRNA含量較低的液體樣本提取的極微量miRNA的逆轉(zhuǎn)錄 |
| abs60267 | miRNA探針?lè)孓D(zhuǎn)錄試劑盒 | 20T40T | miRNA探針?lè)孓D(zhuǎn)錄試劑；加尾的，miRNA探針?lè)晒舛縋CR試劑配套使用 |
| abs60268 | miRNA探針?lè)孓D(zhuǎn)錄試劑盒（血漿） | 20T40T | miRNA探針?lè)孓D(zhuǎn)錄試劑；加尾的，特別適用于血漿、血清等miRNA含量較低的液體樣本提取的極微量miRNA的逆轉(zhuǎn)錄 |
| abs60269 | miRNA莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 | 25T50T | 莖環(huán)法miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑；與miRNA莖環(huán)染料法熒光定量PCR試劑盒配套使用 |
| abs60270 | miRNA莖環(huán)染料法熒光定量PCR試劑盒 | 200T400T | SYBR Green染料法定量試劑，搭配的逆轉(zhuǎn)錄是莖環(huán)法的 |
| abs60271 | miRNA加尾染料法熒光定量PCR試劑盒 | 200T300T400T | SYBR Green染料法定量試劑，搭配的逆轉(zhuǎn)錄是加尾法的 |
| abs60272 | miRNA探針?lè)晒舛縋CR試劑 | 100T200T400T | 探針?lè)ǘ吭噭淮钆涞哪孓D(zhuǎn)錄是加尾形式的探針?lè)孓D(zhuǎn)錄試劑盒 |
三、高通量miRNA定量及篩選
① miRCURY LNA miRNA Focus PCR Panel：集成式篩選多個(gè)miRNA 的表達(dá)
產(chǎn)品特點(diǎn)：
• 即用型 miRNA PCR panel 專(zhuān)注于特定應(yīng)用、樣本類(lèi)型或疾病
• 快速且易于使用，無(wú)需預(yù)放大
• 高重現(xiàn)性和最小技術(shù)變化的簡(jiǎn)單協(xié)議
• 可靠區(qū)分密切相關(guān)的 miRNA 以及成熟和前體 miRNA
miRCURY LNA miRNA Focus PCR Panel快速索引
| 英文名稱(chēng) | 中文名稱(chēng) |
| Apoptosis | 凋亡 |
| B-Cell Activation | B 細(xì)胞活化 |
| Brain Cancer | 腦癌 |
| Breast Cancer | 乳腺癌 |
| Cancer | 癌癥 |
| Cancer PathwayFinder | 癌癥ｍｉＲＮＡ 發(fā)現(xiàn)者 |
| Cancer Stem Cells | 腫瘤干細(xì)胞 |
| Cardiovascular disease Focus | 心血管疾病 |
| Cell Development & Differentiation | 細(xì)胞分化和發(fā)育 |
| CSF-Exosome | CSF-外泌體 |
| Diabetes | 糖尿病 |
| Fibrosis | 纖維化 |
| Hypoxia Signaling | 缺氧信號(hào) |
| Immunopathology | 免疫病理學(xué) |
| Inflammatory Response & Autoimmunity | 炎癥反應(yīng)和自身免疫 |
| Liver miFinder | 肝臟miRNA 發(fā)現(xiàn)者 |
| miFinder | miRNA 發(fā)現(xiàn)者 |
訂購(gòu)信息
| 產(chǎn)品 | 說(shuō)明 | 貨號(hào) |
| miRCURY LNA miRNA Focus PCR Panel | 以上任一panel | 339325 |
| miRCURY LNA miRNA QC PCR Panel | 質(zhì)控板，適用于樣本質(zhì)量差，正式panel前的質(zhì)檢 | 339331 |
| miRCURY LNA Custom PCR Panel | 定制miRNA pcr panel | 339330 |
四、microRNA功能研究工具
① miRNA Mimic
miRNA mimic被設(shè)計(jì)用來(lái)模擬自然發(fā)生的、成熟的miRNA。將miRNA模擬物引入細(xì)胞將增加含有該特定miRNA的RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RISC)的比例。通過(guò)研究這種miRNA活性增加的表型后果，有可能發(fā)現(xiàn)miRNA的功能。
（1）LNA修飾mimic
訂購(gòu)信息：
| 產(chǎn)品 | 說(shuō)明 | 貨號(hào) |
| miRCURY LNA miRNA Mimic | 5nmol或20nmol，標(biāo)準(zhǔn)脫鹽可選FAM標(biāo)簽 | 339173 |
| 339174 | ||
| miRCURY LNA Premium miRNA Mimic | 5nmol，HPLC純化，帶有Biotin標(biāo)簽 | 339178 |
| miRCURY LNA miRNA Mimic Negative Control | 5nmol或20nmol，F(xiàn)AM標(biāo)簽或者Biotin標(biāo)簽可選 | Varies YM00479902– |
| miRCURY LNA miRNA Mimic Negative Control 4 | 5nmol或20nmol，F(xiàn)AM標(biāo)簽或者Biotin標(biāo)簽可選 | Varies YM00479903– |
| miRCURY LNA miRNA Mimic Negative Control 5 | 5nmol或20nmol，F(xiàn)AM標(biāo)簽或者Biotin標(biāo)簽可選 | Varies YM00479904– |
(2)miRIDIAN mimic
訂購(gòu)信息：
| 產(chǎn)品類(lèi)型 | 規(guī)格 | 貨號(hào) | |
| miRIDIAN microRNA Mimic | 2/5/10/20/50 nmol | C-HMR-XX-0005 | |
| C-HMR-XX-0020 | |||
| C-HMR-XX-0050 | |||
| C-HMR-XX-0010 | |||
| C-HMR-XX-0002 | |||
| shMIMIC Lentiviral microRNA | 甘油菌質(zhì)粒 | GSM11927 | |
| GSH11926 | |||
| GSR11928 | |||
| shMIMIC Inducible Lentiviral microRNA | 甘油菌質(zhì)粒 | GSH11929 | |
| GSM11930 | |||
| GSR11931 | |||
| miRIDIAN microRNA Hairpin Inhibitor | 2/5/10/20/50 nmol | IH-HMR-XX-0005 | |
| IH-HMR-XX-0010 | |||
| IH-HMR-XX-0020 | |||
| IH-HMR-XX-0050 | |||
| IH-HMR-XX-0002 | |||
| 模擬物Mimic | 陽(yáng)性對(duì)照 | 陰性對(duì)照 | 轉(zhuǎn)染對(duì)照 |
| PPIB, GAPDH, miR-122 | Negative1, 2 | Transfection Control with Dy547 | |
② miRNA Inhibitors and Power Inhibitors
miRNA Inhibitors 是一種反義寡核苷酸，具有與其靶點(diǎn)互補(bǔ)的完整序列。當(dāng)被導(dǎo)入細(xì)胞時(shí)，它們將目標(biāo)miRNA隔離在高度穩(wěn)定的異源雙鏈體中，有效防止miRNA與其正常細(xì)胞相互作用。有三種不同類(lèi)型的miRNA Inhibitors可供選擇。
(1)LNA修飾inhibitor
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| 產(chǎn)品 | 說(shuō)明 | 貨號(hào) |
| miRCURY LNA miRNA Inhibitors | 5 nmol，骨架PO即正常的磷酸二酯核苷酸鍵；可選FAM標(biāo)簽 | 339121 |
| miRCURY LNA miRNA Power Inhibitors | 1 nmol、5nmol或15nmol；骨架PS（不易降解），效率比普通版本更高，無(wú)需轉(zhuǎn)染試劑，可選FAM標(biāo)簽 | 339130 |
| 339131 | ||
| 339132 | ||
| Negative control A | 1 nmol、5nmol或15nmol，普通或power款，可選FAM標(biāo)簽 | Varies-YI00199006- |
| Negative control B | 1 nmol、5nmol或15nmol，普通或power款，可選FAM標(biāo)簽 | Varies-YI00199007- |
| Custom miRCURY LNA miRNA Inhibitors | 定制的po骨架的抑制劑，規(guī)格5nmol或15nmol，可選FAM標(biāo)簽 | 339141 |
| 339142 | ||
| Custom miRCURY LNA miRNA Power Inhibitors | 定制的骨架PS（不易降解）抑制劑，效率比普通版本更高，無(wú)需轉(zhuǎn)染試劑，規(guī)格5nmol，可選FAM標(biāo)簽 | 339146 |
| Custom miRCURY LNA miRNA Inhibitors in vivo Large Scale | 定制的miRCURY LNA miRNA體內(nèi)大規(guī)模抑制劑，通過(guò)HPLC和Na +鹽交換純化，可用量為5 mg – 1 kg 之間可選擇 | 339203 |
對(duì)于每種抑制劑，我們提供以下兩種對(duì)照：
陰性對(duì)照A：在NCBI和miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)中，與任何生物中的任何序列的同源性均不超過(guò)70％
陰性對(duì)照B：在NCBI和miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)中，與任何人類(lèi)，小鼠或大鼠序列的同源性均不超過(guò)70％。不建議在植物中使用
(2)miRIDIAN inhibitor
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| 產(chǎn)品類(lèi)型 | 規(guī)格 | 貨號(hào) | |
| miRIDIAN microRNA Hairpin Inhibitor | 2/5/10/20/50 nmol | IH-HMR-XX-0005 | |
| IH-HMR-XX-0010 | |||
| IH-HMR-XX-0020 | |||
| IH-HMR-XX-0050 | |||
| IH-HMR-XX-0002 | |||
| 阻遏物Inhibitor | 陽(yáng)性對(duì)照 | 陰性對(duì)照 | 轉(zhuǎn)染對(duì)照 |
| MiR-16 | Negative1, 2 | Transfection Control with Dy547 | |
③ miRNA Target Site Blockers
利用靶位點(diǎn)阻斷劑（Target Site Blockers）發(fā)揮miRNA的功能，miRNA通常會(huì)調(diào)節(jié)多個(gè)靶標(biāo)的基因表達(dá)，并且抑制miRNA會(huì)導(dǎo)致所有這些靶標(biāo)的抑制。因此，miRNA抑制后觀察到的表型是幾個(gè)靶標(biāo)阻遏作用的綜合結(jié)果。然而，放松對(duì)這些靶標(biāo)中的一些靶標(biāo)通常會(huì)顯著地影響表型。識(shí)別這些靶標(biāo)對(duì)于理解miRNA的功能至關(guān)重要。靶位點(diǎn)阻斷劑使研究人員能夠研究miRNA對(duì)單個(gè)靶標(biāo)的作用。
使用靶標(biāo)封閉劑研究 microRNA 的目標(biāo)區(qū)域，從分子角度更有針對(duì)性的研究 microRNA 功能。單個(gè)目標(biāo)對(duì)所獲得的表型的作用可以通過(guò)目標(biāo)位點(diǎn)阻斷劑(TSB)進(jìn)行研究，特異性地阻止了microRNA與其中一個(gè)RNA靶點(diǎn)的相互作用。
產(chǎn)品特征：
• 定制設(shè)計(jì)的目標(biāo)位點(diǎn)阻斷劑，用于特異性抑制 miRNA 目標(biāo)
• 精巧的設(shè)計(jì)和優(yōu)秀的高親和力，無(wú)論目標(biāo)序列如何
• 優(yōu)秀的體外和體內(nèi)功效
• 由于缺乏依賴(lài)于 RNase H 的 mRNA 降解，優(yōu)秀的性能和高蛋白表達(dá)
• 在非常低的濃度下有效，在目標(biāo)位點(diǎn)上勝過(guò) miRNA
• 具有持久反義活性的優(yōu)秀生物穩(wěn)定性
訂購(gòu)信息：
| 產(chǎn)品 | 說(shuō)明 | 貨號(hào) |
| miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blocker | 體外5nmol，具有不同的標(biāo)簽和純化選項(xiàng)，以管形式提供 | 339194 |
| miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blocker, in vivo ready | 體內(nèi)5nmol或15nmol，具有不同標(biāo)簽和純化選項(xiàng)，以管形式提供 | 339199 |
| 339200 | ||
| miRCURY LNA miRNA Power Target Site Blockers, in vivo Large Scale | 體內(nèi)靶點(diǎn)阻斷劑大規(guī)模，通過(guò)HPLC和Na +鹽交換純化，可用量為5 mg – 1 kg | 339201 |
五、LNA檢測(cè)探針--NB及原位雜交
① LNA檢測(cè)探針 — Northern Blotting及原位雜交
針對(duì)mRNA、lncRNA或miRNA的定位檢測(cè)，Exiqon可提供LNA檢測(cè)探針，序列特異性強(qiáng)，靈敏度高、探針標(biāo)記方式靈活多樣，尤其適合用于Northern Blotting和原位雜交實(shí)驗(yàn)，可滿(mǎn)足研究者的不同實(shí)驗(yàn)需求。
LNA鎖核酸探針核心優(yōu)勢(shì)
● 優(yōu)秀的靈敏性和特異性
● 可檢測(cè)所有已知的mRNA、lncRNA、microRNA，并可支持定制
● Tm均一化探針可實(shí)現(xiàn)ISH multiplexing及自動(dòng)化
● 可提供無(wú)標(biāo)記，預(yù)置標(biāo)記及訂制標(biāo)記形式的探針
● 與放射性及非放射性方法兼容
● 適用于多種樣本類(lèi)型
LNA探針已經(jīng)成功的使用在多種樣本類(lèi)型中（見(jiàn)圖1），包括整體樣本（whole-mount），單細(xì)胞，冷凍切片及FFPE組織樣本等。對(duì)于FFPE樣本，我們推薦使用miRCURYLNA microRNA ISH Optimization Kits進(jìn)行優(yōu)化來(lái)調(diào)整自己探針的最佳使用量和試劑配比，從而確保自身探針實(shí)驗(yàn)的成功。
圖1：LNA探針已經(jīng)成功的使用在多種樣本類(lèi)型中
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| 產(chǎn)品 | 說(shuō)明 | 貨號(hào) |
| miRCURY LNA miRNA Custom Detection Probes | 1 nmol 或 10 nmol 不同標(biāo)記的定制miRCURY LNA miRNA檢測(cè)探針 | 339115 |
| 339116 | ||
| miRCURY LNA miRNA Detection Probes | 1 nmol 或 10 nmol 不同標(biāo)記的miRCURY LNA miRNA檢測(cè)探針 | 339111 |
| 339112 | ||
| Custom LNA mRNA Detection Probes | 250 nmol 或 1 umol 合成劑量不同標(biāo)記的LNA mRNA探針 | 339500 |
| 339501 | ||
| Control for Custom LNA mRNA Detection Probes | 5 nmol Custom LNA mRNA對(duì)照探針 | 339508 |
| miRCURY LNA miRNA ISH Buffer Set (FFPE) | 2x Formamide-free miRNA ISH buffer, Proteinase K | 339450 |
| miRCURY LNA miRNA ISH Optimization Kit (FFPE) | 進(jìn)行miRNA ISH 實(shí)驗(yàn)建立及條件優(yōu)化 | 339451 |
| 339459 |
六、miRNA 相關(guān)轉(zhuǎn)染
① 基于脂質(zhì)分子的轉(zhuǎn)染試劑--HiPerFect Transfection Reagent （貨號(hào)：301705）
● 低至 10 pM siRNA的高效轉(zhuǎn)染
● 實(shí)現(xiàn)低濃度siRNA的使用，最大限度減少脫靶效應(yīng)
● 多種貼壁和懸浮細(xì)胞，以及原代細(xì)胞系已經(jīng)利用 HiPerFect Transfection Reagent成功轉(zhuǎn)染（精選細(xì)胞系詳見(jiàn)表1）。
● siRNA 的轉(zhuǎn)染可能引起脫靶效應(yīng)，產(chǎn)生非特異性的RNAi實(shí)驗(yàn)結(jié)果。使用低濃度的siRNA，可大大降低脫靶效應(yīng)。有了HiPerFect Transfection Reagent，低至10 pM siRNA也能觀察到高效的轉(zhuǎn)染和沉默，讓等量的siRNA可用于更多實(shí)驗(yàn)（圖1）。
表1 成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系
| 細(xì)胞系 | 細(xì)胞類(lèi)型 | 所使用的siRNA濃度（實(shí)使Knockdown%) |
| K562 | 人慢性髓性白血病細(xì)胞 | 5nM(85%) |
| Jurkat | 人T細(xì)胞 | 75nM(83%) |
| D1.1 | 人T細(xì)胞 | 50nM(84%) |
| RAW 264.7 | 小鼠巨噬細(xì)胞 | 25nM(77%) |
| J774.A1 | 小鼠巨噬細(xì)胞 | 50nM(97%) |
| PMA-di?erentiated THP-1 | 人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞 | 5nM(82%) |
| MEL | 鼠紅白血病細(xì)胞 | 5?20nM(50?70%) |
圖1. 皮摩爾siRNA的高效轉(zhuǎn)染。利用HiPerFect Transfection Reagent (3μl),在24孔板中用各種量的CDC2 siRNA和非沉默對(duì)照siRNA（對(duì)照）轉(zhuǎn)染HeLaS3細(xì)胞。48小時(shí)后，通過(guò)實(shí)時(shí)定RT-PCR分析CDC2的表達(dá)。
② PEI陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑-- INTERFERin® （貨號(hào)：101000036、101000028）更少的siRNA，更高的沉默效率，降低脫靶效應(yīng)！
● 高效基因沉默效率：在多種細(xì)胞中達(dá)到超過(guò)90%的基因沉默
● 極低的脫靶效應(yīng)：使用低至1nM siRNA
● 溫和的轉(zhuǎn)染模式：保持優(yōu)秀的細(xì)胞活率
● 操作簡(jiǎn)單：兼容血清和抗生素
圖注：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作手冊(cè)在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的3LL細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染
圖注：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作手冊(cè)在CaSKi細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染
③ 活體轉(zhuǎn)染方案---in vivo-jetPEI®（貨號(hào)：101000040、101000030）
注射型轉(zhuǎn)染試劑，用于基因治療和疫苗！
in vivo-jetPEI®的優(yōu)勢(shì)：
● 使用便捷：兩步操作
● 給藥方便：可用于各種注射途徑，以達(dá)目標(biāo)
● 量身定制：專(zhuān)家優(yōu)化的操作方案
in vivo-jetPEI®的介紹：
● 適用于任何動(dòng)物模型的DNAsi/sh/miRNA活體轉(zhuǎn)染
● 享有盛名：*的活體轉(zhuǎn)染技術(shù)，引用文獻(xiàn)超過(guò)700篇
● 成功的產(chǎn)物：從基礎(chǔ)研究到人臨床研究（提供GMP級(jí)產(chǎn)品）
圖注：使用in vivo-jetPEI®在動(dòng)物模型上的各種給藥途徑
七、miRNA文庫(kù)構(gòu)建
① QIAseq miRNA Library Kit（貨號(hào)：331502、331505）
基于分子條形碼技術(shù)的高精度特異性小RNA快速測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建文案
● 采用分子條形碼（UMI）技術(shù)用于擴(kuò)增偏倚的去除
● 僅需1ng總RNA，可僅依靠試劑盒內(nèi)含的磁珠進(jìn)行純化而無(wú)需切膠回收
● 可用于miRNA，piRNA等Small RNA的表達(dá)分析以及全新Small RNA的發(fā)現(xiàn)
● 基于qPCR的*miRNA QC系統(tǒng)及外源參照，可用于樣本質(zhì)量以及測(cè)序后NGS線(xiàn)性度和可重復(fù)性的評(píng)估
圖注：“gel-free”小RNA快速文庫(kù)構(gòu)建流程
訂購(gòu)信息
| 產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| QIAseq miRNA Library Kit (12) | 12rxn，without adapters | 331502 |
| QIAseq miRNA Library Kit (96) | 96rxn，without adapters | 331505 |
| QIAseq miRNA 12 Index IL (12) | 12 indexes for 12 samples | 331592 |
| QIAseq miRNA 48 Index IL (96) | Two 48 indexes for 96 samples | 331595 |
| QIAseq miRNA 96 Index IL (96) | HT format (dried primes) with 96 indexes for 96 samples | 331565 |
| QIAseq miRNA 12 Index TF (12) | 12 indexes for 12 samples | 331582 |
| QIAseq miRNA 48 Index TF (96) | Two 48 indexes for 96 samples | 331585 |
| QIAseq miRNA Library QC Spike-ins | 96 reactions | 331535 |
| QIAseq miRNA Library QC PCR Panel Kit | 48 reactions | 331541 |
| QIAseq miRNA Library QC qPCR Assay Kit | 48 reactions | 331551 |
上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司
試劑 | 耗材 | 儀器 | 軟件 | 定制 | 實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 供應(yīng)鏈
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