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酵母菌破壁方法的革新
閱讀：3051發(fā)布時(shí)間：2017-3-22
酵母菌是基因表達(dá)研究和重組蛋白生產(chǎn)的通用宿主。然而，傳統(tǒng)酶解法進(jìn)行酵母mRNA和內(nèi)容蛋白提取通常非常困難。我們以細(xì)胞總RNA提取為例，對(duì)各種酵母破壁方法進(jìn)行比較。我們用不同的方法對(duì)酵母菌破壁，然后用Trizol試劑進(jìn)行RNA的提取，zui后進(jìn)行電泳檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不同破壁方法效果如下：
SPEX公司Freezer/Mill冷凍研磨儀將上述液氮研磨法進(jìn)一步改良，使酵母破壁這樣的實(shí)驗(yàn)更加簡單，無人值守即可完成。將樣品裝入密閉的研磨容器，浸入液氮，采用電磁振蕩技術(shù)，電磁往復(fù)驅(qū)動(dòng)鋼制撞子，振蕩裝機(jī)樣品，動(dòng)能慣性更大，實(shí)現(xiàn)高動(dòng)能撞子大面積撞擊，快速粉碎研磨。過程中，樣品始終處于液氮溫度（-196°C）。
實(shí)驗(yàn)方法：
*步：將樣品研磨罐預(yù)冷凍。
第二步：將酵母菌液加入液氮中，控制速度，使菌液進(jìn)入液氮中后形成小顆粒。將菌體液氮顆粒轉(zhuǎn)入研磨罐中。放入冷凍研磨儀的樣品倉。
第三步：設(shè)置研磨程序，預(yù)冷10-15min，研磨2min，15個(gè)循環(huán)，兩次研磨之間間歇1min。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
經(jīng)檢驗(yàn)，用此法能使得90%以上的酵母細(xì)胞破壁。酵母的RNA和細(xì)胞內(nèi)蛋白保持高活性。
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