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四種常用的PCR擴增儀的區(qū)別
PCR擴增儀,又稱為PCR基因擴增儀、PCR擴增儀、聚合酶鏈反應擴增儀,俗稱PCR儀。PCR儀實際就是一個溫控設備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進行溫度控制,廣泛運用于學、生物學實驗室中。
根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀四類。
1、普通PCR儀
一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀稱作傳統(tǒng)PCR儀,也叫普通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運行。主要是用于簡單的、對目的基因退火溫度的擴增。該儀器主要應用于科學研究、教學、學臨床、檢驗檢疫等機構。
2、梯度PCR儀
一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度,通常有12種溫度梯度)的PCR儀稱作梯度PCR儀。因為被擴增的不同DNA段,其適退火溫度是不同的,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增,就可以篩選出表達量高的適退火溫度,進行有效的擴增。用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間,多應用于科研、教學機構,檢驗、檢疫等。
3、原位PCR儀
用于從細胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細胞內(nèi)基因擴增儀稱作原位PCR儀。如病源基因在細胞的位置或目的基因在細胞內(nèi)的作用位置等。不但可以檢測到靶DNA,又能標出靶序列在細胞內(nèi)的位置,對于在分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實用價值。主要應用于臨床、科研。
4、實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng)的PCR儀稱作熒光定量PCR儀。其PCR擴增原理和普通PCR儀擴增原理相同,只是PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng)得出量化的實時結果輸出。熒光定量PCR儀有單通道、雙通道和多通道。主要用于學臨床檢測、生物研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等機構。