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實時熒光定量PCR(RealTime PCR)技術(shù)服務(wù)
實時熒光定量PCR 技術(shù)即是在PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號實時監(jiān)測
整個PCR 進程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR 避免
了傳統(tǒng)PCR 以終產(chǎn)物檢測定量產(chǎn)生的偏差,提高實驗的重復(fù)性。該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)
胞mRNA 表達量的變化;比較不同組織的 mRNA 表達差異;驗證基因芯片,siRNA 干擾的實驗
結(jié)果等。
SYBR Green 熒光染料法
SYBR Green 是一種DNA 結(jié)合染料,能非特異地?fù)饺氲诫p鏈DNA 中去。在游離狀態(tài)下,它不發(fā)出熒光,
但一旦結(jié)合到雙鏈DNA 中以后,便可以發(fā)出熒光。它的zui大優(yōu)點就是可以與任意引物、模板相配合,用
于任意反應(yīng)體系中。從經(jīng)濟角度考慮,它也比其它的探針的價格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA
結(jié)合,所以一旦反應(yīng)體系中出現(xiàn)非特異擴增,那它就會影響到定量結(jié)果的可靠性與重復(fù)性。要避免這種不
利因素,可以通過選擇良好的引物并優(yōu)化反應(yīng)條件以消除非特異性影響。
TaqMan 熒光探針法
PCR 擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記
一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR 擴
增時,Taq 酶的5-3外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系
統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA 鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR 產(chǎn)
物形成*同步。
實時熒光定量PCR檢測
項目 | 經(jīng)銷商(元) | 終端(元 ) | 說明 |
引物設(shè)計合成 | 200元/對 | 300元/對 | 客戶提供基因名稱(中英文全稱)。 |
RT-PCR 檢測(普通電泳PCR) | 60元/樣本/指標(biāo) | 100元/樣本/指標(biāo) | 包括所有試劑,提供分析數(shù)據(jù)、步驟。 |
實時熒光定量(Taqman探針法) | 120元/樣本/指標(biāo) | 200元/樣本/指標(biāo) | 包括所有試劑,提供分析數(shù)據(jù),、步驟(20例起) |
SYBR Green 染料法 | 60元/樣本/指標(biāo) | 120元/樣本/指標(biāo) | 包括所有試劑、提供數(shù)據(jù)、圖、實驗步驟。 |
實時熒光定量PCR檢測
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