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人胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA Kit操作方法
用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過一夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘?! ?/span>
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。
問題1:如果我們檢測(cè)的樣本是組織樣本,請(qǐng)問應(yīng)該選用什么來組織勻漿,濃度是多少? | |||||||
答:一般我們?cè)噭┖械慕M織勻漿,都是按照10%進(jìn)行勻漿,即1g組織加9ml的勻漿液,勻漿液可以選取sheng理鹽水,也可以選取PBS,但*是PBS,PH=7.2-7.4,濃度為0.01mol. | |||||||
問題2:請(qǐng)問我訂購了你們的試劑盒,但是樣本是分批次收集的,我可以分批次實(shí)驗(yàn)嗎。 | |||||||
答:可以的,我們的試劑盒橫條是可拆卸的,試劑盒使用之后放到2-8度冰箱保存,下次可以繼續(xù)使用,但是建議是拆封之后一個(gè)月內(nèi)用完。 | |||||||
問題3:請(qǐng)問各種標(biāo)本的處理方式,你可以發(fā)給我一下嗎? | |||||||
答:當(dāng)然可以。標(biāo)本要求如下: | |||||||
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。 | |||||||
液體類標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。 | |||||||
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。 | |||||||
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。 | |||||||
3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。 | |||||||
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。 | |||||||
5.培養(yǎng)細(xì)胞:檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 | |||||||
6.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。 | |||||||
7.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融. | |||||||
8.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 |
人胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA Kit
上海信帆生物科技有限公司代理多種國外原裝ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品,生物試劑,科研抗體,細(xì)胞株等,生物耗材等,其中包括sigma,R&D,ScienCell,ATCC,wak0,omega,Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等國外各類公司的產(chǎn)品。
人胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA Kit
公司在保證質(zhì)量同時(shí),以價(jià)格優(yōu)、到貨快、服務(wù)周到、誠信交易為宗旨與理念,致力于各種生物試劑、抗體、ELISA試劑盒、細(xì)胞因子、耗材的銷售推廣及服務(wù)工作。公司提供免費(fèi)代測(cè),更好的為您服務(wù)。詳情請(qǐng)或咨詢?cè)诰€人員。本公司的更多產(chǎn)品.
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