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低滲鹽溶液(0.075mol/LKCl) 提供優(yōu)惠高品質(zhì)試劑
產(chǎn)品名稱： 低滲鹽溶液(0.075mol/LKCl)
規(guī)格：500ml
用途：
注意事項(xiàng)：由氯化甲等組成。
儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月
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低滲鹽溶液 提供優(yōu)惠高品質(zhì)試劑
鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction, P CR)技術(shù),在體外合成目的基因。重組DNA技術(shù):
重組DNA技術(shù)又稱為基因工程(genetic engineering)或分子克隆(molecular cloning),是指采用人工方法將不同來源的DNA進(jìn)行重組,并將重組后的DNA引入宿主細(xì)胞中進(jìn)行增殖或表達(dá)的過程。
1.載體和目的基因的分離(分):對(duì)載體DNA和目的基因分別進(jìn)行分離純化,得到其純品。
⑴載體:常用的載體(vector)主要包括質(zhì)粒(plasmid)、噬菌體(phage)和病毒(virus)三大類。這些載體均需經(jīng)人工構(gòu)建,除去致病基因,并賦予一些新的功能,如有利于進(jìn)行篩選的標(biāo)志基因、單一的限制酶切點(diǎn)等。
①質(zhì)粒:是存在于天然細(xì)菌體內(nèi)的一種獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外的雙鏈環(huán)狀DNA,具有獨(dú)立復(fù)制的能力,通常帶有細(xì)菌的抗藥基因。②噬菌體:可通過轉(zhuǎn)染方式將其DNA送入細(xì)菌體內(nèi)進(jìn)行增殖。常用的為人工構(gòu)建的λ噬菌體載體,當(dāng)目的基因與噬菌體DNA進(jìn)行重組時(shí),可采用插入重組方式,也可采用置換重組方式。
③病毒:常用的為SV40,通過感染方式將其DNA送入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行增殖。
⑵目的基因:①直接從染色體DNA中分離:僅適用于原核生物基因的分離。②人工合成:根據(jù)已知多肽鏈的氨基酸順序,利用遺傳密碼表推定其核苷酸順序再進(jìn)行人工合成。適應(yīng)于編碼小分子多肽的基因。③從mRNA合成cDNA:采用一定的方法釣取特定基因的mRNA,再通過逆轉(zhuǎn)錄酶催化合成其互補(bǔ)DNA(cD NA),除去RNA鏈后,再用DNA聚合酶合成其互補(bǔ)DNA鏈,從而得到雙鏈DNA。④從基因文庫(kù)中篩選:將某一種基因DNA用適當(dāng)?shù)南拗泼盖袛嗪?與載體DNA重組,再全部轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞,得到含全部基因組DNA的種群,稱為G文庫(kù)(genomic DNA library)。將某種細(xì)胞的全部mRNA通過逆轉(zhuǎn)合成cDNA,然后轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞,得到含全部表達(dá)基因的種群,稱為C-文庫(kù)(cDNA library)。C-文庫(kù)具有組織細(xì)胞特異性。⑤利用PCR合成:如已知目的基因兩端的序列,則可采用聚合酶
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