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上海信帆生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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時(shí)間:2017-3-24閱讀:1025
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文章名稱(chēng)《BMSCs移植對(duì)缺血性腦卒中大鼠IL-1β、TNF-a表達(dá)的影響》,主要講述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem ceIIs,BMSCs)移植治療大腦中動(dòng)脈阻塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型鼠后,在不同時(shí)間點(diǎn)采用western blot、ELISA方法檢測(cè)IL-1β、TNF-α的表達(dá)變化,分析BMSCs移植對(duì)缺血性腦卒中后炎性因子的影響,探討B(tài)MSCs移植治療缺血性腦卒中修復(fù)受損神經(jīng)功能的可能抗炎機(jī)制。 

 

文章中使用的大鼠IL-1β聯(lián)酶免疫試劑盒和大鼠TNF-a聯(lián)酶免疫試劑盒均有我司提供!

 

取幼年雄性SD大鼠骨髓腔細(xì)胞,通過(guò)全骨髓培養(yǎng)法和細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增得到BMSCs,傳至第4代,免疫熒光法鑒定,誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及神經(jīng)干細(xì)胞并鑒定。

 

取成年雄性SD大鼠,用Longa線(xiàn)栓法制造MCAO模型。參考Bederson JB評(píng)分法測(cè)評(píng)大鼠神經(jīng)功能缺損,篩選入組MCAO模型鼠;TTC染色法顯示腦組織梗死范圍,剔除TTC(-)或有出血的大鼠樣本。   

 

取造模成功的MCAO模型鼠*隨機(jī)分為2組:A組/MCAO模型組(n=16),即建立MCAO模型后注射1ml生理鹽水;B組/實(shí)驗(yàn)組(n=16),即建立MCAO模型后通過(guò)尾靜脈注射法移植1ml2×l09/L BMSCs;A、B組各分為處理后1d、3d、7d、14d時(shí)間點(diǎn)亞組(n=4)。

 

取正常大鼠設(shè)C組/空白組(n=4),不予任何干預(yù)。各亞組行心臟取血,ELISA方法檢測(cè)大鼠血清IL-1β、TNF-α的表達(dá)變化;生理鹽水灌注取腦,western blot方法檢測(cè)大鼠腦組織IL-1β、TNF-α的表達(dá)變化。

  

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結(jié)果   

 

1.成功培養(yǎng)得到BMSCs。鏡下細(xì)胞形態(tài):原代BMSCs呈圓形或類(lèi)圓形,貼壁數(shù)量少;經(jīng)過(guò)純化、擴(kuò)增,貼壁細(xì)胞增多,呈長(zhǎng)梭形,集落樣生長(zhǎng),局部呈漩渦狀;至P7代,細(xì)胞逐漸老化,以扁平細(xì)胞為主。細(xì)胞免疫熒光法鑒定:CD54(+)、CD34(-),符合BMSC免疫表型特點(diǎn)。BMSCs誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞見(jiàn)細(xì)小顆粒于培養(yǎng)液;誘導(dǎo)為脂肪細(xì)胞見(jiàn)紅色脂滴于胞漿;誘導(dǎo)為神經(jīng)干細(xì)胞見(jiàn)棕色顆粒于胞漿。  

 

2.大鼠神經(jīng)功能評(píng)分:造模后1天實(shí)驗(yàn)組評(píng)分較模型組無(wú)明顯差異(P>0.05),3天、7天、14天實(shí)驗(yàn)組較模型組均有下降(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。   

 

3.大鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)(單位:ng/L):1天、3天、7天、14天各亞組:IL-1β濃度為模型組27.0±0.35、29.2±0.60、25.2±0.65、22.8±0.66,實(shí)驗(yàn)組25.2±0.31、26.8±0.56、20.8±0.39、19.2±0.94,空白組10.9±0.54;TNF-α濃度為模型組231±1.46、225±4.98、216±4.16、198±4.61,實(shí)驗(yàn)組189±2.85、178±3.17、166±5.27、157±6.03,空白組146±6.86;

模型組較空白組均明顯增多(P<0.05),實(shí)驗(yàn)組較模型組均減少(P<0.05),但較空白組仍增多(P<0.05)。模型組及實(shí)驗(yàn)組與空白組比較:IL-1β表達(dá)1天增多,3天達(dá)高峰,7天下降,14天持續(xù)下降,但仍高于空白組(P<0.05);TNF-α表達(dá)1天增多達(dá)高峰,3天下降,7天、14天緩慢下降,但仍高于空白組(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。  

 

4.大鼠腦組織IL-1β、TNF-α表達(dá)(灰度值):1天、3天、7天、14天各亞組:IL-1β為模型組5502±108.9、6267±160.5、4425±158.1、3352±187.1,實(shí)驗(yàn)組4217±143.7、4706±111.8、3235±150.7、2307±120.7,空白組1874±70.7;TNF-α為模型組7801±148.9、6296±170.7、5399±240.9、3458±180.2;

實(shí)驗(yàn)組6468±180.9、5789±119.7、4647±207.3、2828±152.6,空白組2215±159.5;模型組較空白組均增高(P<0.05),實(shí)驗(yàn)組較模型組均降低(P<0.05)較空白組增高(P<0.05)。模型組及實(shí)驗(yàn)組與空白組比較:IL-1β表達(dá)1天增高,3天達(dá)高峰,7天下降,14天持續(xù)下降但仍高于空白組(P<0.05);

TNF-α表達(dá)1天增高達(dá)高峰,3天下降,7天、14天緩慢下降,但仍高于空白組(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。   

 

結(jié)論  

 

1.缺血性腦卒中模型鼠中IL-1β、TNF-α表達(dá)增加,其神經(jīng)損傷可能與炎癥反應(yīng)有關(guān)。  

 

2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植可降低MCAO模型鼠IL-1β、TNF-α的表達(dá),其修復(fù)神經(jīng)功能的作用可能與BMSC下調(diào)炎性因子減輕炎癥反應(yīng)

 

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信帆生物公司主要代理產(chǎn)品:
ELISA試劑盒:進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清:胎牛血清,科研血清,動(dòng)物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原裝血清 。
生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品:進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體:一抗,二抗,流式抗體等。
放免試劑盒:進(jìn)口放免試劑盒,國(guó)產(chǎn)放免試劑盒,進(jìn)口美國(guó)鳳凰等放免試劑盒。
實(shí)驗(yàn)室代測(cè)服務(wù):放免代測(cè),WB實(shí)驗(yàn),免疫組化代測(cè),熒光定量PCR代測(cè),病理細(xì)胞染色代測(cè),生化實(shí)驗(yàn)代測(cè)等。

 

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