熱烈慶祝上海信帆生物與重慶大學(xué)再次攜手合作成功，訂購我司：大鼠IL-10 elisa試劑盒。在此我們感謝重慶大學(xué)的老師和同學(xué)對我司的支持，我們將會以更多的產(chǎn)品服務(wù)更多的科研用戶朋友。、

重慶醫(yī)科大學(xué)創(chuàng)建于1956年，由上海*醫(yī)學(xué)院（現(xiàn)復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院）分遷來渝組建而成，原名重慶醫(yī)學(xué)院，1985年更名為重慶醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校是國務(wù)院學(xué)位委員會批準(zhǔn)的*具有博士和碩士學(xué)位授予權(quán)的單位。2015年，成為重慶市人民政府、國家衛(wèi)生計生委和教育部共建高校。

學(xué)校由位于渝中區(qū)的袁家崗校區(qū)和位于重慶大學(xué)城的縉云校區(qū)組成，校園總面積2650余畝。其中，縉云校區(qū)占地2100余畝，校園環(huán)境優(yōu)美，風(fēng)景如畫。

學(xué)校具有招收博士后研究人員，港澳臺學(xué)生和外國留學(xué)生資格?，F(xiàn)有全日制在校學(xué)生近28000人，其中研究生5100余人，本科生20000余人，留學(xué)生700余人。

學(xué)?，F(xiàn)有4個一級學(xué)科博士學(xué)位授權(quán)點、38個二級學(xué)科博士學(xué)位授權(quán)點，12個一級學(xué)科碩士學(xué)位授權(quán)點、86個二級學(xué)科碩士學(xué)位授權(quán)點，2個博士專業(yè)學(xué)位授權(quán)點、11個碩士專業(yè)學(xué)位授權(quán)點；有7個博士后科研流動站、工作站；有4個國家重點學(xué)科，12個省級重點一級學(xué)科，76個省級重點二級學(xué)科。在“2013年教育部第三輪學(xué)科評估”中，研究醫(yī)學(xué)、護理學(xué)、生物醫(yī)學(xué)工程等排名*列。

學(xué)?，F(xiàn)有國家、省部級研究機構(gòu)28個，其中國家工程研究中心1個、國家生物產(chǎn)業(yè)基地實驗動物中心1個、教育部重點實驗室3個、省部共建國家重點實驗室培育基地1個、省級工程研究中心5個，省級重點實驗室16個，省級人文社科基地1個。另設(shè)有省級“海外高層次人才創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)基地”和“院士專家工作站”。

大鼠白細(xì)胞介素-10（IL-10））酶聯(lián)免疫分析

 試劑盒使用說明書

*部分  ELISA簡介

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。自上世紀(jì)70年代初問世 以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用 于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。

第二部分 ELISA 的樣本實驗準(zhǔn)備

在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的，-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

液體類標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞：檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
7. 標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
8. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

第三部分 ELISA試劑盒的檢測目的和實驗原理

1.檢測目的

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素-10（IL-10）含量。

2.實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠白細(xì)胞介素-10（IL-10））水平。用純化 的大鼠白細(xì)胞介素-10（IL-10））抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中 依次加入白細(xì)胞介素-10（IL-10），再與 HRP 標(biāo)記的白細(xì)胞介素-10（IL-10）抗 體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素-10（IL-10）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo) 準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠白細(xì)胞介素-10（IL-10））濃度。

第四部分  試劑盒組成

第五部分 操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
3. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
6. 溫育：操作同 3。
7. 洗滌：操作同 5。
8. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘.
9. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
10. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
11. 操作程序總結(jié)：略 

第六部分  計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD  值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。圖略

第七部分  注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

第八部分 檢測范圍

3 ng/L -100 ng/L

第九部分 保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6 個月