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多樣本直接PCR系列專題

More Genotyping, Less Time and Fewer Reagents

PCR-based Genotyping等實(shí)驗(yàn)，常需純化樣本基因組。當(dāng)待測(cè)樣本較多時(shí)，純化基因組的過(guò)程費(fèi)時(shí)、操作重復(fù)，并且實(shí)驗(yàn)成本高。翊圣生物通過(guò)改造Taq DNA聚合酶，優(yōu)化PCR反應(yīng)體系開(kāi)發(fā)出無(wú)需基因組純化的Direct PCR Kit系列產(chǎn)品。

Clever PCR：Direct PCR

翊圣Direct PCR Kit是直接從樣本開(kāi)始，以未經(jīng)基因組純化的微量原始樣本（圖1-A）或其裂解產(chǎn)物（圖1-B）作為模板，進(jìn)行PCR-based Genotyping（見(jiàn)圖1）。與常規(guī)PCR-based Genotyping相比，Direct PCR Kit樣本用量少，操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)成本低，可高通量化樣本檢測(cè)。

圖1 Direct PCR技術(shù) A. 直接法：取少量樣本直接加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定。B. 裂解法：樣本取樣后，加入裂解液中，裂解釋放基因組，取少量裂解上清液加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)

★直接：無(wú)需進(jìn)行費(fèi)時(shí)而昂貴的DNA純化

★快速：10min完成模板制備，zui少50min完成PCR反應(yīng)

★簡(jiǎn)便：樣品無(wú)需剪碎或研磨即可完成裂解

        PCR Mix為預(yù)混液形式，減少加樣步驟

★節(jié)省：材料用量少

★高通量：可在96孔板中完成裂解反應(yīng)

翊圣生物Direct PCR Kit

Direct PCR Kit實(shí)驗(yàn)過(guò)程

本系列產(chǎn)品運(yùn)用*的蛋白酶裂解體系，裂解樣品，裂解液可直接作為模板，搭配試劑盒中的PCR Master Mix進(jìn)行基因擴(kuò)增。

圖2 動(dòng)物、小鼠組織直接PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程

圖3 動(dòng)物全血直接PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程

圖4 植物組織直接PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

Ø 改造的Taq DNA Polymerase是Direct PCR的保證：*的抑制物耐受性

對(duì)于非純化樣本作為模板時(shí)，會(huì)引入很多對(duì)PCR反應(yīng)有抑制的成分。以普通的PCR反應(yīng)體系和Taq DNA聚合酶較難得到理想的結(jié)果，甚至無(wú)法進(jìn)行PCR擴(kuò)增。本系列試劑盒中PCR Mix為配方優(yōu)化預(yù)混液，采用改造的Taq DNA Polymerase，增加與模板DNA結(jié)合能力，對(duì)于常見(jiàn)PCR抑制劑具有更高的耐受性，因此具有更廣泛的模板適應(yīng)性。

圖5 直接PCR Kit中的PCR Mix具有更高的雜質(zhì)耐受度。相同模板量，用不同的PCR Mix進(jìn)行PCR，同時(shí)在體系中加入不同濃度的各種PCR反應(yīng)抑制物。比較不同條件下的PCR產(chǎn)物量。

翊圣生物針對(duì)不同樣本，開(kāi)發(fā)出一系列產(chǎn)品。

一、多動(dòng)物通用型：Animal Tissue Direct PCR Kit

Ø zui快速：操作時(shí)間短

圖6 翊圣動(dòng)物組織直接PCR試劑盒更加節(jié)省時(shí)間。

Ø  實(shí)驗(yàn)例：基因敲除小鼠基因型鑒定

圖7 動(dòng)物組織直接PCR試劑盒檢測(cè)基因敲除動(dòng)物組織直擴(kuò)結(jié)果。M：100bp DNA ladder。1-8：以裂解產(chǎn)物為模板。+：以50ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。單條帶（580bp）：敲除動(dòng)物純合子基因組。單條帶（180bp）：野生型基因組。兩條帶（580bp/180bp）：敲除動(dòng)物雜合子基因組。

二、嚙齒類型：Mouse Tissue Direct PCR Kit

Ø 更快速：基因釋放充分

圖8 小鼠組織直接PCR試劑盒不同裂解時(shí)間直擴(kuò)結(jié)果。M：100bp DNA ladder。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。

Ø 更*：基因釋放充分

1、優(yōu)于常規(guī)堿裂解方法

圖9 鼠尾經(jīng)不同裂解方式處理后，直擴(kuò)結(jié)果。檢測(cè)基因：SOX21。M：100 bp DNA ladder。1-2：以常規(guī)堿裂解方式處理裂解產(chǎn)物為模板。3-4：以小鼠組織直接PCR試劑盒裂解產(chǎn)物為模板。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。

2、媲美同類產(chǎn)品

圖10 鼠尾經(jīng)不同品牌同類產(chǎn)品裂解處理后，直擴(kuò)結(jié)果。檢測(cè)基因：SOX21。M ：100 bp DNA ladder。+ ：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。

三、多動(dòng)物通用型：Animal Blood Direct PCR Kit

Ø zui大模板耐受度：高達(dá)45%

圖11 不同體積的EDTA抗凝人血加入量，動(dòng)物血液直接PCR試劑盒直擴(kuò)結(jié)果。檢測(cè)基因：SOX2。M：DNA Marker I。循環(huán)數(shù)：30個(gè)循環(huán)。

四、植物類型：Plant Tissue Direct PCR Kit

Ø 多類型植物樣本驗(yàn)證

圖12 不同類型植物葉片直擴(kuò)結(jié)果。M：100 bp DNA ladder。C：相應(yīng)植物純化基因組DNA為模板。1-2：葉片組織裂解產(chǎn)物為模板。循環(huán)數(shù)：30個(gè)循環(huán)。

客戶實(shí)驗(yàn)

1、轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定

圖13青島大學(xué)用戶使用鼠尾直接PCR試劑盒擴(kuò)增某基因結(jié)果。M：DNA marker II。1-12：轉(zhuǎn)基因小鼠鼠尾裂解液。13：陽(yáng)性質(zhì)粒對(duì)照。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：30個(gè)循環(huán)。

2、水稻基因直擴(kuò)

圖14 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)用戶使用植物直接PCR試劑盒擴(kuò)增水稻相關(guān)基因

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