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關鍵詞：脂質體，脂質體轉染試劑，Lipo
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent
脂質體核酸轉染試劑
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） | *（元） |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質體核酸轉染試劑 | 40802ES02 | 0.5ml | 4℃ | 738.00 | 488.00 |
40802ES03 | 1 ml | 4℃ | 1308.00 | 868.00 | |
40802ES08 | 5×1ml | 4℃ | 4878.00 | 3248.00 |
產品 | RMB/ml | RMB/反應* |
Hieff TransTM | 868 | 1.7 |
Lipofectamine? 2000 | 3090-3700 | 6.2-7.4 |
Lipofectamine? 3000 | 3710-4447 | 6.3-8.9 |
FuGene? 6 | 4135 | 8.3 |
*以24孔板為例，每孔2ul轉染試劑
產品描述
Hieff TransTM脂質體核酸轉染試劑是一種多用途的脂質體轉染試劑，適用于DNA、RNA和寡核苷酸的轉染，對大多數(shù)真核細胞具有很高的轉染效率。其*的配方使其可直接加入培養(yǎng)基中，血清的存在不會影響轉染效率，這樣可以減少去除血清對細胞的損傷。轉染后不需要除去核酸-Hieff TransTM復合物或更換新鮮培養(yǎng)基，也可在4～6小時后除去。
Hieff TransTM以無菌的液體形式提供，濃度為1mg/ml。對于 24 孔板轉染，每次用2μl左右，則1ml Hieff TransTM約可做500 次轉染；對于6孔板，每次用10μl左右，則1ml Hieff TransTM約可做100 次轉染；
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。產品4oC保存，一年有效。不可冷凍！
Hieff Trans轉染實例
注意事項
1) Hieff TransTM要求細胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳，這有助于減少陽離子脂質體細胞毒性造成的影響；如果你研究的基因要求比較長的表達時間，比如細胞周期相關基因，或者細胞表面蛋白，選擇細胞鋪板密度要求較低的轉染試劑，不適合用。
2) Hieff TransTM可用于有血清培養(yǎng)基的轉染，并且轉染前后不需要換培養(yǎng)基。但是，制備轉染復合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。另外，要檢測所用的無血清培養(yǎng)基與的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3) 轉染的時候培養(yǎng)基中不能添加抗生素。
4) 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率，質粒中的內毒素是轉染的大敵。
5) 陽離子脂質體應該在4度保存，要注意避免多次反復長時間開蓋，因為可能會導致脂質體氧化而影響轉染效率。
6) 初次使用應優(yōu)化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到zui大的轉染效率。DNA 和轉染試劑的比例，通常推薦是1:2-1:3，比如24孔板內接種0.5-2×105個細胞，使用0.5 μg DNA和1-1.5 μl 轉染試劑。通過調整DNA/Hieff TransTM比例優(yōu)化轉染效率，保證細胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值在1：0.5-1：5。
操作流程（以24孔板為例，其他培養(yǎng)板加樣體積請參考表一）
【注】：轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度進行優(yōu)化*使用量。
貼壁細胞：轉染前一天（20-24小時），胰酶消化細胞并計數(shù)，細胞鋪板（不含抗生素），使其在轉染時密度為90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）。
懸浮細胞：轉染當天，配制DNA復合物之前，24孔板中細胞鋪板，每500μl生長培養(yǎng)基（不含抗生素）中加入4-8 × 105 cells。
1. 按照以下體系配制DNA-Hieff TransTM復合物：
1）對于每孔細胞，使用50μl無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋0.5μg DNA?；靹?。
2）對于每孔細胞，使用50μl無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋1-2.5μl Hieff TransTM。
Hieff TransTM稀釋后室溫孵育5min（在30min內同稀釋的DNA 混合，保溫時間過長會降低活性）。
【注意】：即使使用OPTI-MEMⅠ稀釋，細胞也可以使用DMEM 培養(yǎng)。如果DMEM 作為的稀釋液，必須在5min內同稀釋的DNA混合。
2. 混合稀釋的DNA和稀釋的（總體積100μl），輕輕混勻，并在室溫（15-25℃）孵育20min，使得DNA-脂質體復合物形成。此時溶液可能會混濁，但不會影響轉染。
【注意】：DNA-脂質體復合物室溫至少穩(wěn)定保存5h。
3. 直接將100μl DNA-Hieff TransTM復合物加入到細胞培養(yǎng)板每個孔中，搖動培養(yǎng)板，輕輕混勻。
【注意】：如果在無血清條件下轉染，使用含血清的正常生長培養(yǎng)基進行細胞鋪板。在加入復合物前移去生長培養(yǎng)基，替換為500μl無血清培養(yǎng)基。
4. 37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48h，直至進行轉基因表達分析，無需去掉復合物或更換培養(yǎng)基。然而，可能有必要在4-6h后更換生長培養(yǎng)基，不會降低轉染活性。
穩(wěn)轉細胞株：轉染24h后，按照1：10或更高比例在細胞中加入新鮮生長培養(yǎng)基，轉染48h后加入篩選培養(yǎng)基。
懸浮細胞株：在細胞中加入DNA-Hieff TransTM復合物后，如果需要可以4h后加入PMA和/或PHA。對于Jurkat細胞，PHA和PMA的終濃度分別為1μg/ml和50ng/ml，可以提高CMV啟動子活性和基因表達。對于K562細胞，只加入PMA足以提高啟動子活性。
轉染體系的調整
對于不同的細胞培養(yǎng)板，Hieff TransTM、DNA、細胞和培養(yǎng)基的使用量會有所不同，具體請參考下表（表一）。對于96 孔板培養(yǎng)，不需要提前一天進行細胞鋪板，可以直接在平板中制備復合物，然后將細胞懸浮液加入到復合物就可以了，這樣進一步減少了轉染時間。這種改進步驟已經(jīng)過293-H，293-F，COS-7L和CHO細胞的試驗，同傳統(tǒng)方法相比活性稍低。快捷的步驟和蛋白表達細胞系的轉染使得非常適用于96 孔板的高通量轉染，比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達。
表一 在不同的培養(yǎng)容器中轉染，，核酸，細胞和培養(yǎng)基的用量
Culture vessel | Surf. area per well1 | Shared reagents | DNA transfection | RNAi transfection | |||
Vol. of plating medium | Vol. of dilution medium2 | DNA | RNA | ||||
96-well | 0.3 cm2 | 100 μl | 2×25 μl | 0.1 μg | 0.2-0.5 μl | 5 pmol | 0.25 μl |
24-well | 2 cm2 | 500 μl | 2×50 μl | 0.5 μg | 1-2.5 μl | 20 pmol | 1.0 μl |
12-well | 4 cm2 | 1 ml | 2×100 μl | 1 μg | 2-4.5 μl | 40 pmol | 2.0 μl |
6-well | 10 cm2 | 2 ml | 2×250 μl | 2-4 μg | 5-10 μl | 100 pmol | 5 μl |
60-mm | 20 cm2 | 5 ml | 2×0.5 ml | 4-8 μg | 10-20 μl | 200 pmol | 10 μl |
10-cm | 60 cm2 | 15 ml | 2×1.5 ml | 12-24μg | 30-60 μl | 600 pmol | 30 μl |
1 不同廠商提供的細胞培養(yǎng)板表面積可能有所不同；
2 稀釋DNA或RNAi所用的培養(yǎng)基體積。
【注】：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據(jù)細胞類型及其他實驗條件進行優(yōu)化。使用時DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值保持在1:0.5-1:5。
