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ELISA試劑盒操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法

時(shí)間：2013-10-31閱讀：223

操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法

問題	可能原因	解決方法
顯色淡，靈敏度偏低	1、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長，溫度太高	盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫
	2、試劑盒未充分平衡	試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。
	3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃	注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意
	4、保溫時(shí)間不足	校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)
	5、洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長、洗滌次數(shù)增加	按說明書要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)
	6、移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔	校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，一次性使用
	7、蒸餾水水質(zhì)有問題	使用新鮮合格的蒸餾水
	8、底物作用時(shí)間不足	準(zhǔn)確定時(shí)
背景深，全部呈有色,	1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留	濃縮洗液準(zhǔn)確配制；10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋；充分洗滌，*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染
	2、樣品污染	樣品應(yīng)新鮮采集，或低溫保存，防止污染
	3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時(shí)間過長	調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，準(zhǔn)確定時(shí)
	4、吸嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不*	吸嘴盡可能一次性使用
	5、蒸餾水被污染	使用新鮮蒸餾水
	6、酶等試劑混用	不同批號(hào)試劑勿混用
	7、一次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本量過多，加樣時(shí)間太長，導(dǎo)致實(shí)際反應(yīng)時(shí)間延長	合理安排實(shí)驗(yàn)，避免幾塊酶標(biāo)板同時(shí)加樣
重復(fù)性不佳	1、樣品數(shù)量多少不一，加樣時(shí)間有長有短	重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與*次接近
	2、保溫時(shí)間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致	重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性
	3、加樣量不一致	樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴
出現(xiàn)白板，陽性對(duì)照不顯色	顯色液變質(zhì)	更換新的顯色液
	洗滌液配制有誤	請(qǐng)按說明書所示稀釋倍數(shù)配制
	未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入	注意不要漏加
	終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂?/td>	每次加液前均應(yīng)看清標(biāo)簽