血小板內(nèi)皮細胞粘附分子-1[CD31]ELISA試劑盒 (種屬全)pg級靈敏度

●分子實驗中常用生化試劑原理匯總● 1．溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌體細胞壁的主要化學(xué)成分肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵，因而具有溶菌的作用。當(dāng)溶液中pH小于8時，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，維持滲透壓，防止DNA受機械剪切力作用而降解。 EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金屬離子，抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用（DNase作用時需要一定的金屬離子作輔基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因為溶菌酶的反應(yīng)要求有較低的離子強度的環(huán)境。 2．NaOH－SDS液： NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是穩(wěn)定的。但當(dāng)pH＞12或pH＜3時，就會引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1／L，加抽提液時，該系統(tǒng)的pH就高達12.6，因而促使染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性。 SDS：SDS是離子型表面活性劑。它主要功能有：（1）溶解細胞膜上的脂質(zhì)與蛋白，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜。（2）解聚細胞中的核蛋白。（3）SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為R-O-SO3-…R＋-蛋白質(zhì)的復(fù)合物，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取過程中，必須把它去除干凈，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA時）受到干擾。 3. 3mol／L NaAc（pH4.8）溶液： NaAc的水溶液呈堿性，為了調(diào)節(jié)pH至4.8，必須加入大量的冰醋酸。所以該溶液實際上是NaAc-HAc的緩沖液。用pH4.8的NaAc溶液是為了把pH12.6的抽提液，調(diào)回pH至中性，使變性的質(zhì)粒DNA能夠復(fù)性，并能穩(wěn)定存在。而高鹽的3mol／L NaAc有利于變性的大分子染色體DNA、RNA以及SDS-蛋白復(fù)合物凝聚而沉淀之。前者是因為中和核酸上的電荷，減少相斥力而互相聚合，后者是因為鈉鹽與SDS－蛋白復(fù)合物作用后，能形成較小的鈉鹽形式復(fù)合物，使沉淀更*。 4．為什么用無水乙醇沉淀DNA？用無水乙醇沉淀DNA，這是實驗中常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點是可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng)，對DNA很安全，因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時，乙醇會奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般實驗中，是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合，其乙醇的終含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇來替代無水乙醇（因為無水乙醇的價格遠遠比95％乙醇昂貴）。但是加95％的乙醇使總體積增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA損失也增大，尤其用多次乙醇沉淀時，就會影響收得率。折中的做法是初次沉淀DNA時可用95％乙醇代替無水乙酵，后的沉淀步驟要使用無水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA。一般在室溫下放置15－30分鐘即可。

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血小板內(nèi)皮細胞粘附分子-1[CD31]ELISA試劑盒，本應(yīng)用試劑盒已完成多中心臨床驗證，并通過國家食藥監(jiān)總局的認證。我司通過建立覆蓋歐美的采購中心，與歐美1000多個品牌建立了正式的代理與合作，涵蓋所有的生物試劑門類，特別是二三線高質(zhì)量品牌產(chǎn)品，具有壓倒性地優(yōu)勢。產(chǎn)品領(lǐng)域：分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、細菌學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、細胞治療、臨床應(yīng)用等領(lǐng)域。主營產(chǎn)品：流式抗體、ELISA試劑盒、標(biāo)準品和對照品、生化試劑、抗體和抗原、細胞因子、技術(shù)服務(wù)、實驗耗材和消耗品、儀器設(shè)備。

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●穩(wěn)定轉(zhuǎn)染●：即進入細胞的質(zhì)粒整合入細胞基因組中，并能隨細胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。這是相對瞬時轉(zhuǎn)染而言的。瞬時轉(zhuǎn)染的表達時間短暫，外源基因?qū)胝匣蚪M的幾率非常低，絕大部分以游離形式存在，不能隨細胞分裂而一同復(fù)制，導(dǎo)致后拷貝數(shù)被稀釋，無法達到持續(xù)表達外源基因的目的。一般用轉(zhuǎn)染試劑進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，多為瞬時轉(zhuǎn)染。 ●一般如下情況需要構(gòu)建穩(wěn)定株●： 1. 長期在目的細胞中研究基因功能，通過構(gòu)建穩(wěn)定株，可以大大降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本，也極大方便實驗研究； 2. 部分蛋白半衰期極長，瞬時 RNA 只能干擾表達，無法去除已經(jīng)表達的目的蛋白，通過構(gòu)建穩(wěn)定株可以實現(xiàn)更好的基因干擾效果； 3. 瞬轉(zhuǎn)往往會引入*拷貝數(shù)的表達，導(dǎo)致因為人為因素造成實驗結(jié)果的不，構(gòu)建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細胞進行實驗研究； 4. 需要用誘導(dǎo)表達系統(tǒng)的，主要是一些致死基因或者是需要時空表達的； 5. 需要用細胞做動物實驗的，比如裸鼠成瘤等，往往需要構(gòu)建成穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

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編輯：小檀20181009