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撫生試劑-小鼠脾細(xì)胞和小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合
閱讀：515 發(fā)布時(shí)間：2014-6-241單抗技術(shù)的理論依據(jù)
單抗技術(shù)的基本原理為：小鼠骨髓瘤細(xì)胞能在體內(nèi)外無(wú)限增殖和分泌無(wú)抗體活性的免疫球蛋白，而免疫小鼠脾細(xì)胞具有產(chǎn)生抗體的能力，但不能無(wú)限增殖。采用融合劑（PEG等）將這兩種細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞。這種雜交瘤細(xì)胞具有親代細(xì)胞的主要特怔。既能在人工培養(yǎng)下無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。
淋巴雜交瘤技術(shù)是單抗技術(shù)的重要理論依據(jù)。在前文中已經(jīng)述及。Kohler和Milstein將喪失合成次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hypoxanthine guanosine phosphoribosyl transferase，HGPRT）的骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合。融合由仙臺(tái)病毒介導(dǎo)，雜交細(xì)胞通過(guò)在含有次黃嘌呤（hypoxanthine，H）、氨基喋呤（aminopterin，A）和胸腺嘧啶核苷（thymidine，T）的培養(yǎng)基（HAT）中生長(zhǎng)進(jìn)行選擇。在融合后的細(xì)胞群體里，盡管未融合的正常脾細(xì)胞和相互融合的脾細(xì)胞是HGPRT+，但不能連續(xù)培養(yǎng)，只能在培養(yǎng)基中存活幾天，而未融合的HGPRT-骨髓瘤細(xì)胞和相互融合的HGPRT-骨髓瘤細(xì)胞不能在HAT培養(yǎng)基中存活，只有骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞形成的雜交瘤細(xì)胞因得到分別來(lái)自親本脾細(xì)胞的HGPRT和親本骨髓瘤細(xì)胞的連續(xù)繼代特性，而在HAT培養(yǎng)基中存活下來(lái)。象這種用被抗原免疫過(guò)的脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合得到雜交瘤的技術(shù)就是雜交瘤技術(shù)。
上述作為融合劑的仙臺(tái)病毒在后來(lái)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被聚乙二醇（PEG）代替。因?yàn)榫垡叶嫉娜诤闲Ч?，且避免了病毒的污染?wèn)題。
然而雜交瘤技術(shù)的誕生也是免疫學(xué)在理論和技術(shù)兩方面發(fā)展的必然結(jié)果，抗體生成的克隆選擇學(xué)說(shuō)、抗體基因的研究、抗體結(jié)構(gòu)與生物合成以及其多樣性產(chǎn)生機(jī)制的揭示等，為雜交瘤技術(shù)提供了技術(shù)貯備。
2 單抗的制備的基本程序和方法雜交瘤技術(shù)在具體操作上，各實(shí)驗(yàn)室使用的程序不盡一致。本節(jié)中介紹的方法是適合國(guó)內(nèi)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室操作的程序。
在開展雜交瘤技術(shù)制備單抗之前，培養(yǎng)骨髓瘤和雜交瘤細(xì)胞必須具備下列主要儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)、CO2恒溫培養(yǎng)箱、超低溫冰箱（-70℃）、倒置顯微鏡、高壓鍋、精密天平或電子天平、液氮罐、離心機(jī)（水平轉(zhuǎn)子，4000r/min）、37℃水浴箱、純水裝置、濾器、真空泵等。其需要的主要器械包括：100ml、50ml、25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶，10ml、1ml刻度吸管，試管，滴管（彎頭、直頭），平皿，燒杯，500ml、250ml、100ml鹽水瓶，青霉素小瓶，10ml、5ml、1ml注射器等，96孔、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，融合管（50ml圓底帶蓋玻璃或塑料離心管），眼科剪刀，眼科鑷，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，可調(diào)微量加樣器（~50ul，~200ul，~1000ul），彎頭針頭，200目篩網(wǎng)，小鼠固定裝置等。淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)的主要步驟包括：動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、雜交瘤細(xì)胞的篩選與單抗檢測(cè)、雜交瘤細(xì)胞的克隆化、凍存、單抗的鑒定等。