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免疫學(xué)三大工具:IHC、ELISA和WB區(qū)別
閱讀：1129 發(fā)布時間：2023-2-7在科研實驗技術(shù)方面，恒遠生物為了幫助初學(xué)者快速上手，減少摸索苦惱，專門為大家準(zhǔn)備了一套標(biāo)準(zhǔn)的實驗流程和技巧。檢測實驗樣本，ELISA、WB、IHC選哪個？看完這篇你就知道了。
IHC：
IHC免疫組化抗原技術(shù)是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細胞化學(xué)技術(shù)。
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）：
ELISA用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附"的含義。免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因為所檢測的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。
Western bolt:
是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。可以用于定性和半定量。WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針"是抗體，“顯色"用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。
1.對于IHC來說，定位是免疫組化大的優(yōu)勢
該方法可在組織和細胞中進行抗原的準(zhǔn)確定位, 因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，這樣就可以進行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，相比于其他蛋白檢測方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高，是定位檢測分析方法對病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義，尤其對于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。
2.WB與IHC技術(shù)相比，定量可能更加準(zhǔn)確
當(dāng)然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量，進而間接反映它們的定位)，但敏感性遠遠低于IHC。
3.ELISA與IHC相比，定量準(zhǔn)確，是分泌性蛋白檢測方法之一
尤其對于微定量分析多個樣本非常有用，所用試劑和樣品量很少，結(jié)果精確。IHC針對性比較強，而且一般是以組織或者細胞為樣本，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測樣本中抗體的陽性或者陰性，一般不用于定量檢測。
4.WB和ELISA的區(qū)別
WB：可以看到特異性的條帶，但是定量比較煩
ELISA：可以直接讀出濃度，但是如果抗體有非特異性結(jié)合，那得到的數(shù)值就不可信。
WB：只能半定量,但是可以檢測細胞膜蛋白,這點elisa做不到
ELISA：可用定量方法檢測蛋白,也就是說可以觀察不同濃度刺激物對目的蛋白的影響
WB：所檢測的一般是抗原，而elisa抗原抗體都可以檢測。
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