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ELISA試劑盒新手入門的使用技術(shù)報告
閱讀：624 發(fā)布時間：2016-3-2新的一年，上海恒遠(yuǎn)技術(shù)專員為ELISA試劑盒新手入門的使用技術(shù)報告做出一番整理，在這里分享給您，僅供參考。
ELISA試劑盒方法原理
一、雙抗體夾心法測定抗原
1.將抗原免疫*種動物獲得的抗體吸附于固相表面;
2.加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物;
3.加抗原免疫第二種動物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
4.加酶標(biāo)抗抗體(第二種動物抗體的抗體);
5.加底物。底物的降解量＝抗原量。
二、直接法測定抗原
1.將抗原吸附在載體表面；
2.加酶標(biāo)抗體，形成抗原—抗體復(fù)合物；
3.加底物。底物的降解量＝抗原量。
三、間接法測定抗體
1.將抗原吸附于固相載體表面；
2.加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物；
3.加酶標(biāo)抗體；
4加底物。 測定底物的降解量＝抗體量。
ELISA試劑盒操作注意
1. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
2.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
3.底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
4.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
5.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
6.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
8.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
9.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
10.底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
11.加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
12.按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
ELISA試劑盒質(zhì)控分析
1.人員培訓(xùn)內(nèi)容包括：①檢驗項目的基本原理(ELISA試劑盒原理)；②熟悉檢測技巧，了解易出差錯的環(huán)節(jié)及難點；熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；③熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識；④某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。
2.基本了解
1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)。
2.特點：ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"。
3.酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，進(jìn)行信號放大；
4.有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過程；
5.靈敏度特異性相對較高。
6.局限性：只能檢測到ng水平
7.精密度差(批內(nèi)CV15-20%)；
8.線性范圍窄(一個數(shù)量級)；
9.存在"HD-HOOK"效應(yīng)。
以上由上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司技術(shù)人員整理，希望對新手朋友有所幫助，還需要了解更多詳細(xì)內(nèi)容可以我們。