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ELISA法測(cè)定肺炎衣原體實(shí)驗(yàn)步驟
閱讀：618 發(fā)布時(shí)間：2014-4-16| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 52.8KB |
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| 資料類(lèi)型 | PNG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 618次 |
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實(shí)驗(yàn)中所需要用到的試劑：
| 1、濃縮酶聯(lián)物； | 5、弱陽(yáng)性對(duì)照； |
| 2、標(biāo)本稀釋液； | 6、預(yù)包被微孔板； |
| 3、終止液； | 7、底物A、B； |
| 4、陽(yáng)性對(duì)照； | 8、陰性對(duì)照。 |
實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)過(guò)程：
1、配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內(nèi)可置室溫環(huán)境中，長(zhǎng)期可存于2—8℃環(huán)境中。
2、配制酶聯(lián)物 按1：101倍稀釋?zhuān)慈?u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul(根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定稀釋量)，未用完的丟棄。
3、待試劑盒平衡至室溫后，待測(cè)標(biāo)本按1；51稀釋?zhuān)慈?tA血清與200u1標(biāo)本稀釋液混合。
4、將稀釋標(biāo)本置37℃環(huán)境中20min。
5、各加100ul陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、陰性對(duì)照及已稀釋待測(cè)標(biāo)本上清液于相應(yīng)孔中，空白對(duì)照孔加100u1標(biāo)本稀釋液，蓋好反應(yīng)板，置37℃環(huán)境中30min。
6、甩盡板中液體，每孔用200～300ul洗滌液洗5次，每次均需拍干。
7、每孔加酶聯(lián)物100~1，蓋好反應(yīng)板，置37℃環(huán)境中30min。
8、甩盡板中液體，洗5次，每次拍干。
9、加底物A、B各1滴或各50tzl，混勻，置37℃環(huán)境中15min。
10、取出，加終止液1滴，用酶標(biāo)儀450nm測(cè)其OD值。若肉眼觀察則不加終止液，直接判斷結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過(guò)后，我們要做一個(gè)結(jié)果判斷：
1、陰性對(duì)照平均OD值須小于0．20。
2、弱陽(yáng)性對(duì)照平均OD值須在0．20—0．65。
3、弱陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個(gè)條件時(shí)，本試驗(yàn)結(jié)果可信，否則重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
4、若待測(cè)標(biāo)本孔顯色比弱陽(yáng)性對(duì)照孔深則判為陽(yáng)性，反之為陰性。但在弱陽(yáng)性對(duì)照值上下10％范圍內(nèi)再測(cè)1次，如確實(shí)高于弱陽(yáng)性對(duì)照則可判為陽(yáng)性。