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OmicsLink™ shRNA表達克隆原理

圖2. shRNA導(dǎo)致基因表達抑制的機制

OmicsLink™ shRNA表達克隆的特性    

• 所有shRNA靶點序列的選取均經(jīng)過準(zhǔn)確算法計算。根據(jù)基因的不同， shRNA其莖的長度在19到29堿基對之間。這些保證shRNA克隆表達后有很高的表達抑制效率和zui低的脫靶效應(yīng)（off target effect）。
• 克隆shRNA 所采用的載體有慢病毒載體和以哺乳動物細胞為宿主的載體，各類載體擁有不同的啟動子和跟蹤標(biāo)記基因可供選擇。
• 載體中所帶有的綠色熒光跟蹤標(biāo)記基因（ eGFP ）可以用于監(jiān)測質(zhì)粒載體的轉(zhuǎn)染效率和轉(zhuǎn)導(dǎo)病毒的感染效率。
• 載體結(jié)構(gòu)上帶有穩(wěn)定細胞株的篩選標(biāo)記（嘌呤霉素）和綠色熒光跟蹤標(biāo)記基因（EGFP ），這些特性使得該載體既能用于穩(wěn)定抑制效應(yīng)的研究，也可用于瞬時抑制效應(yīng)的研究。
• 使用慢病毒載體系統(tǒng)，可轉(zhuǎn)導(dǎo)shRNA進入常規(guī)的分裂細胞，以及不分裂而難以轉(zhuǎn)染的目的細胞株。
• 載體的各部分序列已經(jīng)過測序，包括啟動子、編碼shRNA的正義和反義鏈、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、終止子和其他接頭序列。

OmicsLink™ 的應(yīng)用    

• 基因表達下調(diào) shRNA克隆對單個基因的基因表達抑制效應(yīng)可以通過和一個包含不規(guī)則序列的陰性對照克隆來比較研究。
• 信號通路研究 我公司的人類基因ORF克隆按照不同的信號傳導(dǎo)、代謝、疾病通路和相關(guān)性、基因家族等進行了分類。將已知同一通路的shRNA克隆以96孔或384孔板的形式排列在一起，可一次研究一組基因在某一信號通路中的功能。目前我公司已可提供針對人類全部激酶基因的shRNA克隆，并已按照按不同激酶的功能進行了分類。
• ORF表達克隆確證 我公司已有shRNA相應(yīng)人類靶基因的ORF克隆，可裝在各種表達載體中，帶有不同的標(biāo)簽和跟蹤標(biāo)記基因。這些正常的ORF表達克隆和在shRNA靶序列帶有沉默突變的同樣的ORF表達克隆，可以用于shRNA確認(rèn)研究和基因功能拯救研究。

產(chǎn)品保證

的表達框已經(jīng)全長測序，包括啟動子、正義和反義靶序列、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、終止信號及其他接頭序列。 對于構(gòu)建到psi-sH1載體中的人類激酶組shRNA克隆，我們每個基因提供1~3個克隆，所有克隆均已通過AP色度法確證其對靶基因的表達抑制水平達到70％以上。對于構(gòu)建到慢病毒和哺乳動物載體的shRNA克隆，我們每個基因提供4個克隆。我們保證至少有1個克隆達到在mRNA水平對靶基因的表達抑制水平達到70%以上，前提是用前面所提的檢測方法，并嚴(yán)格按照說明書所提供的操作流程和注意事項進行實驗。如果經(jīng)過我公司核實，的確4個中沒有1個有所期望的表達抑制水平的話，我公司承諾免費更換1-4個shRNA克隆。