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結(jié)核病的免疫學診斷
2011-5-28 閱讀(879)
十幾年來國內(nèi)外學者一直從MT培養(yǎng)濾液中提純蛋白質(zhì)抗原，由于該方法制備蛋白抗原較煩瑣、費時。因此，近年來，筆者研究室應用基因工程技術克隆、表達MT基因，簡便地獲得了大量MT單一的蛋白抗原（如CFPl0、ESAT6、MPT63、MPT64、Ag8、Ag85B、KatG、16ku、3Sku、65ku等蛋白），研究其診斷應用價值。
（1）血清學診斷 20世紀70年代應用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測患者血清中結(jié)核特異性抗體，成為結(jié)核病常用的輔助診斷手段之一，尤其是近十幾年來金標免疫斑點法檢測抗原抗體反應已成為無需特殊儀器的快速診斷技術。由于結(jié)核患者免疫功能不同而導致對MT抗原識別的差異，此外結(jié)核患者對抗原的識別存在階段特異性，目前任何一個單一的抗原或商品化的組合抗原檢測試劑盒都無法檢測出所有結(jié)核患者血清中的抗結(jié)核抗體，結(jié)核病患者的抗體反應是針對許多MT抗原的。因此，篩選多個純化的結(jié)核病的特異性抗原組成聯(lián)合抗原是目前血清學診斷的研究方向。
（2）皮膚試驗 結(jié)核菌素、純蛋白衍生物（PPD）皮膚試驗是zui常用且zui簡便的一種結(jié)核分枝桿菌感染診斷方法，但由于PPD中含有許多分枝桿菌共同的抗原，PPD皮試陽性并不能鑒別是因為MT復合群感染還是接觸環(huán)境中NTM或卡介苗接種后造成的致敏。因此，PPD皮試診斷的特異度差，用該方法進行結(jié)核病流行病學調(diào)查獲得的結(jié)核分枝桿菌感染率并不能真正反映人群中結(jié)核分枝桿菌感染的實際狀況。目前國內(nèi)外學者通過動物模型或臨床試驗研究純化抗原、合成多肽和重組蛋白，篩選致病性結(jié)核分枝桿菌表達而BCG不澩锏?、颖K計し舫俜⑿捅涮從?DTH）的特異抗原，以期建立新的結(jié)核皮膚診斷試劑。
（3）雙抗體夾心ELISA檢測細胞因子水平 目前的研究已表明活動性肺結(jié)核、結(jié)核性胸膜炎或腦膜炎患者血液中或局部組織的T淋巴細胞、單核細胞或巨噬細胞在MT抗原的激活下，釋放可溶性白細胞介素（1L-2）受體、膜IL-2受體、γ干擾素（1FN-γ）、。腫瘤壞死因子、IL-18和IL-8的水平不同，與正常人或非結(jié)核性疾病差異有顯著性。因此，采用雙抗體夾心ELISA檢測其在血清、胸腔積液、腦積液中的水平，對結(jié)核病具有輔助診斷和鑒別診斷價值；對抗結(jié)核療效和病情轉(zhuǎn)歸的評價具有一定的臨床意義。
（4）T淋巴細胞增殖試驗 MT特異的蛋白抗原（如ESAT6、CFPl0蛋白等）可刺激結(jié)核分枝桿菌感染的人和牛外周血單個核細胞（PBMC）產(chǎn)生增殖反應和大量的IFN-γ，而卡介苗接種的健康人對該抗原反應水平低，其特異性顯著高于MT超聲抗原和培養(yǎng)濾液。結(jié)核病在疾病發(fā)展的不同階段，T淋巴細胞識別的結(jié)核抗原也不盡相同，因此，目前正通過雙抗體夾心ELISA檢測PBMC受特異抗原刺激后產(chǎn)生IFN-了的水平，或通過酶聯(lián)免疫斑點試驗（ELISPOT）檢測分泌IFN-丁的外周血T淋巴細胞，建立新的靈敏度高、特異度強的診斷結(jié)核分枝桿菌感染的特異性方法。但這些方法均為體外的T細胞試驗，技術較復雜，需要高度純化的MT特異的蛋白或多肽抗原及用于細胞培養(yǎng)和細胞因子檢測的儀器、設備，可能難以在臨床上常規(guī)應用。
（5）T細胞亞群分析 結(jié)核病患者存在明顯的細胞免疫功能紊亂，其外周血CD+3、CD+4T淋巴細胞下降，CD+8T淋巴細胞增高，CD+4／CD+8值降低，同時伴有T細胞活化功能障礙，尤其是活動性結(jié)核病更為顯著；但結(jié)核性胸腔積液中淋巴細胞比例、CD+4T淋巴細胞顯著升高。分析T細胞亞群的變化對于病情監(jiān)控、療效判定和預后判斷都具有重要意義，并有助于結(jié)核性和癌性胸腔積液的鑒別。
（6）紅細胞免疫功能測定 紅細胞免疫系統(tǒng)新概念是1981年由美國學者Siegel提出的，經(jīng)過20多年國內(nèi)外學者的研究發(fā)現(xiàn)，紅細胞CRl有黏附C3b、C4b的能力。測定結(jié)核病患者紅細胞免疫黏附能力和紅細胞免疫黏附促進因子，結(jié)果兩者均明顯低于正常人，結(jié)核病患者紅細胞免疫促進因子下降可能是其紅細胞免疫黏附功能降低的重要原因之一。因此，紅細胞免疫功能測定可作為結(jié)核患者免疫功能狀態(tài)的一個新指標，為結(jié)核患者的免疫治療、判斷愈后提供依據(jù)。
