詳細(xì)介紹
sTNFαR,人可溶性腫瘤壞死因子α,腫瘤壞死因子
產(chǎn)品名稱:人sTNFαR ELISA試劑盒
產(chǎn)品別名:人可溶性腫瘤壞死因子α受體ELISA試劑盒
英文名稱:Human soluble Tumor Necrosis Factorαreceptor,sTNFαR ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
ELISA關(guān)鍵步驟為以下幾點(diǎn):
1、盡量用八道或者十二道移液器加樣。對(duì)于相同的試劑,經(jīng)如二抗,酶,顯色液,終止液等。
2、自己的樣品,因?yàn)槊恳豢椎臉悠凡灰粯?,用排槍加有些麻煩,如果一次的樣品比較少,而自己加樣又比較快,可以一個(gè)孔一個(gè)孔的加,但如果想一次把96或者48T的做完,可以先擺好一些PCR管或者準(zhǔn)備一個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。將自己的樣品先加到PCR管或者培養(yǎng)板中(此板間距與酶板板相同)。記得加一定的余量,如一次加樣是50ul,可以先加70ul。加完后再用排槍加樣,這樣可以縮短加樣時(shí)間,減小每個(gè)孔間的時(shí)間誤差。
3、如果有多余的孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔可以做復(fù)孔,在自己的樣品前加一次標(biāo)準(zhǔn)品,加完樣品后再加一次標(biāo)準(zhǔn)品。如果孔不夠,那么可以將標(biāo)準(zhǔn)品放在樣品中間加。
操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9. 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
sTNFαR,人可溶性腫瘤壞死因子α,腫瘤壞死因子