詳細(xì)介紹
sCKR,人可溶性細(xì)胞因子受體,酶免試劑盒
產(chǎn)品名稱(chēng):人sCKR ELISA試劑盒
產(chǎn)品別名:人可溶性細(xì)胞因子受體ELISA試劑盒
英文名稱(chēng):Human soluble cytokine receptor,sCKR ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
ELISA關(guān)鍵步驟為以下幾點(diǎn):
1、盡量用八道或者十二道移液器加樣。對(duì)于相同的試劑,經(jīng)如二抗,酶,顯色液,終止液等。
2、自己的樣品,因?yàn)槊恳豢椎臉悠凡灰粯?,用排槍加有些麻煩,如果一次的樣品比較少,而自己加樣又比較快,可以一個(gè)孔一個(gè)孔的加,但如果想一次把96或者48T的做完,可以先擺好一些PCR管或者準(zhǔn)備一個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。將自己的樣品先加到PCR管或者培養(yǎng)板中(此板間距與酶板板相同)。記得加一定的余量,如一次加樣是50ul,可以先加70ul。加完后再用排槍加樣,這樣可以縮短加樣時(shí)間,減小每個(gè)孔間的時(shí)間誤差。
3、如果有多余的孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔可以做復(fù)孔,在自己的樣品前加一次標(biāo)準(zhǔn)品,加完樣品后再加一次標(biāo)準(zhǔn)品。如果孔不夠,那么可以將標(biāo)準(zhǔn)品放在樣品中間加。
用于檢測(cè)未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。
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加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
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于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml, 37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
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加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
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終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
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結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
sCKR,人可溶性細(xì)胞因子受體,酶免試劑盒