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細胞傳代培養(yǎng)的原理及操作步驟

（一）原理：細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，須進行傳代再培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。

（二）細胞傳代培養(yǎng)具體操作                                            

1、細胞：貼壁細胞株

2、操作步驟

1）將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。

2)加入0.5-1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。

3)瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。

觀察消化也可以用肉眼，當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1-3分鐘。

4)用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

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