羅丹明123染色試劑盒
細(xì)胞凋亡羅丹明123染色試劑盒
（Cell Apoptosis Rhodamine 123 Detection Kit）
Store at-20℃ for one year
Expire date：
一、試劑盒說明
羅丹明123（Rhodamine 123）是一種可透過細(xì)胞膜的陽離子熒光染料，是一種線粒體跨膜電位的指示劑。其在正常細(xì)胞中能夠依賴線粒體跨膜電位進(jìn)入線粒體基質(zhì),熒光強(qiáng)度減弱或消失。而在凋亡發(fā)生時，線粒體膜完整性破壞，線粒體膜通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔開放，引起線粒體跨膜電位（ΔΨm） 的崩潰, Rh123 重新釋放出線粒體, 從而發(fā)出強(qiáng)黃綠色熒光，可用熒光顯微鏡、熒光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀檢測，通過熒光信號的強(qiáng)弱來檢測線粒體膜電位的變化和凋亡的發(fā)生。
本試劑盒適用于培養(yǎng)的細(xì)胞或從組織中提取出的線粒體的膜電位檢測。
二、試劑盒組份
| 組分 | KGA217（100 assays） | 儲存條件 |
| 羅丹明123染液（1 mg/mL） | 1 mL | -20℃ |
| 5×Assays Buffer | 20 mL | -20℃ |
備注：1×Assays Buffer工作液配制：用前將5×Assays Buffer 用雙蒸水稀釋5倍。
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
流式細(xì)胞儀、熒光光度計(jì)或熒光顯微鏡：
激發(fā)波長488～505nm，發(fā)射波長515～575 nm （一般為530nm）；
線粒體提取試劑（可選購凱基線粒體提取試劑盒，CAT NO:KGA827）及儀器；
5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片
四、操作方法
1．細(xì)胞染色及分析
（1）培養(yǎng)細(xì)胞1×106/mL重懸于培養(yǎng)基中；
（2）加入羅丹明123染液0.1μg/mL～50 μg/mL （根椐細(xì)胞種類不同而濃度不同，一般3～10 μg/mL）；
（3）37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育1～30 min（根椐細(xì)胞種類不同而不同，一般10 min）；
（4）離心以培養(yǎng)基洗細(xì)胞兩次；
（5）重懸細(xì)胞于培養(yǎng)基中，37℃，5% CO2培養(yǎng)60 min；
（6） 流式細(xì)胞儀檢測：激發(fā)波長488～505nm，發(fā)射波長515～575 nm （一般為530nm）；
熒光顯微鏡觀察：滴加100μL上述混合液于載玻片上，激發(fā)濾光片波長488nm，阻斷濾光片波長515nm觀察，拍照。
2． 組織提取的線粒體染色及分析
（1）按常規(guī)方法提取的線粒體，用適量的1×Assays Buffer（將5×Assays Buffer 用雙蒸水稀釋5倍）重懸；
（2）常規(guī)方法進(jìn)行蛋白含量測定后，用1×Assays Buffer調(diào)配成3mg/mL的線粒體溶液；
（3）取2mL 1×Assays Buffer和1mL線粒體溶液；
（4）加入適量待測化合物（同時設(shè)空白對照組），250C保溫3 min；
（5）加入羅丹明123染液10μL；
（6） 熒光光度計(jì)檢測：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于250C下測定，激發(fā)波長488～505nm，發(fā)射波長530nm，連續(xù)記錄從0 min～30 min內(nèi)熒光強(qiáng)度的變化。
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