Elisa試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測。

       （一）ELISA測定技術的發(fā)展　　然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環(huán)節(jié)的質量保證才能充分發(fā)揮其方法學的優(yōu)點。

　　一、Elisa試劑盒測定技術的發(fā)展

　　臨床測定技術的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展，而方法學的發(fā)展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。目前，分子生物學正在并zui終肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而*的認識，其對免疫測定技術發(fā)展的影響也是直接而又有效的，它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

　　1、基因工程試劑對免疫測定技術 發(fā)展的影響

　　免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應，所以任何的診斷試劑離不開的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各總化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。

　　HBsAg試劑特點（檢測模式：臨 床抗體夾心法）：

　　包被抗體為山羊多抗，多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應性。

　　酶表抗體為與HBsAg有不同結合位點的鼠復合單位。

　　可測得HBsAg變異樣品。

　　提高檢測的特異性（99.98%）

　　提高檢測的靈敏度，應用Parl Ehrich 學說（PEI）HBsAg標準品，對ad標準品的靈敏度為0.05nｇ/ml對ay標準品靈敏度為0.025ng/ml

　　elisa試劑盒的用途

　　測試劑盒檢測原理

　　ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結合物，經第二次孵育后，酶結合物就會與*次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒 的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性

     （二）　操作步驟　　方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

　　方法二　用于檢測未知抗體的間接法：

　　用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，

　　每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。

　　↓

　　加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔

　　中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）

　　↓

　　于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，

　　37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

　　↓

　　其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

   （三）　試劑器材　　1.　試劑

　?。?）　包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:

　　NaHCO３ 1.59克

　　NaHCO３　2.93克

　　加蒸餾水至1000ml

　?。?）　洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M

　　KH2PO4 0.2克

　　Na2HPO４·12H2O　2.9克

　　NaCl　8.0克

　　KCl　0.2克

　　Tween-20　0.05％　0.5ml

　　加蒸餾水至1000ml

　?。?）　稀釋液：

　　牛血清白蛋白（BSA） 0.1克

　　加洗滌緩沖液至100ml

　　或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用。

　?。?）　終止液（2M　H２SO４）：

　　蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。

　?。?）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:

　　0.2MNa２HPO４（28.4克／L）25.7ml

　　0.1M檸檬酸（19.2克／L）　24.3ml

　　加蒸餾水50ml。

　?。?）　TMB（四甲基聯苯胺）使用液:

　　TMB（10mg／5ml無水乙醇）0.5ml

　　底物緩沖液（PH5.5）　10ml

　　0.75％H２O２　32μl

　?。?）　ABTS使用液:

　　ABTS　0.5mg

　　底物緩沖液（PH5.5）　1ml

　　3％H２O２　2μl

　?。?）　抗原、抗體和酶標記抗體。

　?。?）　正常人血清和陽性對照血清。

　　2.　器材:

　?。?）　聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。

　?。?）　小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。

　?。?）　4℃冰箱，37℃孵育箱。

    （四）試劑盒的清洗

　　自備材料

　　安全性

　　操作注意事項

  （五）　注意事項　　

   1.　正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。