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技術(shù)文章
從土壤中輕松獲取高質(zhì)量RNA
點(diǎn)擊次數(shù)：2538 發(fā)布時間：2010-11-16
詳細(xì)介紹：
從土壤中輕松獲取高質(zhì)量RNA
*，從土壤中提取DNA已非易事，而想從中再提取RNA可說是難上加難。DNA不容易提取是因?yàn)楸旧硗寥乐懈患牟牧暇蜕?，提取過程相對復(fù)雜，造成操作損失；而RNA不容易提取除了以上所提到的原因外，還有一個很關(guān)鍵的原因——無處不在的RNA酶，對RNA的穩(wěn)定存在構(gòu)成極大威脅。另外還有一點(diǎn)就是土壤中某些物質(zhì)的微量殘留都會影響到科研人員后期PCR反應(yīng)。這就是目前國內(nèi)市場中土壤RNA提取產(chǎn)品不多的原因。
因此要想對土壤RNA有較好的提取效果，我們就必須知己知彼，既要對研究對象（土壤）熟知，又要對研究工具（試劑盒）熟悉。
土壤中重要物質(zhì)腐殖質(zhì)
土壤除了為陸生植物提供營養(yǎng)源和水分之外，還是植物生長，進(jìn)行光合作用、能量交換的主要場所；同時也具有微生物生長繁殖所需要的一切營養(yǎng)物質(zhì)及各種條件，是微生物良好的生活場所，有“微生物的天然培養(yǎng)基”之稱。因此土壤是一種重要的環(huán)境要素。
簡單說，土壤是由固相（礦物質(zhì)、有機(jī)質(zhì)）、液相（土壤水分或溶液）和氣相（土壤空氣）三相物質(zhì)四種成分有機(jī)地組成。而所有這些組成在土壤微生物的存在下卻能形成一種對作物生長有利，對科研人員非常不利的物質(zhì)——腐殖質(zhì)。污泥中也不例外，同樣有腐植酸和富里酸存在。
腐殖質(zhì)是由一些異養(yǎng)的微生物，如某些腐生細(xì)菌，把土壤中的動、植物殘體和有機(jī)肥料分解，與礦物質(zhì)顆粒緊密結(jié)合在一起而形成的一種黑色的膠狀物質(zhì)，是土壤有機(jī)質(zhì)的主要類型，一般占土壤有機(jī)質(zhì)總量的85—90％以上。腐殖質(zhì)既含有氮、磷、 鉀、疏、鈣等大量元素，還有微量元素；另外在分解過程中還會產(chǎn)生腐殖酸、有機(jī)酸、維生素及一些激素等。在水體中，腐殖質(zhì)主要指腐殖酸和富里酸。實(shí)驗(yàn)證明，微量腐殖酸或富里酸的存在就會導(dǎo)致PCR的失?。∵@在眾多公司的提取試劑盒中都有相應(yīng)說明。
再加上近期土壤污染（肥料、農(nóng)藥等）的存在，因此導(dǎo)致提取對象成份非常復(fù)雜，提取難度也就可想而知。有的公司產(chǎn)品即使有少量的RNA提出，也會造成科研人員后期的實(shí)驗(yàn)不順暢，這樣的例子已司空見慣。因此解決從土壤提取RNA后腐殖質(zhì)殘留以及其它影響成分的有效去除成了各家公司關(guān)注的焦點(diǎn)。
土壤RNA提取試劑盒
目前市場上常見的試劑盒大概有3-4中，這些試劑盒又通常采用玻璃珠（鋼珠）破碎的方法，然后用玻璃奶和吸附柱反復(fù)漂洗去除雜質(zhì)和腐殖酸，操作過程極其復(fù)雜，一般需要2.5小時以上的操作時間。使用，可能會因?yàn)椴襟E不熟練，超過4個小時。并且有些操作在常溫進(jìn)行，這就很難對RNA進(jìn)行有效保護(hù)，結(jié)果可能會導(dǎo)致即使有RNA的提出，也不再是完整的RNA片段，造成部分或全部降解。
因此，提取過程耗時短，影響物質(zhì)（腐殖質(zhì)等）去除干凈，提取過程RNA穩(wěn)定才是從土壤中輕松獲取高質(zhì)量RNA的必要條件。針對這一目標(biāo)，百泰克公司經(jīng)過多年的不斷探索，集眾家所長，終于開發(fā)了一款非常方便簡單快捷的提取土壤（污泥）中RNA的試劑盒，該試劑盒具有以下特點(diǎn)：
l 操作簡便
整個過程，操作時間僅需1小時，熟練時，能更快，避免操作時間過長RNA降解
l 破碎方法優(yōu)良
采用常見的液氮研磨，既能使RNA處于低溫的保護(hù)狀態(tài)，不容易降解，又不需要特殊的設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)成本。同時還可避免玻璃珠破碎過于劇烈導(dǎo)致的片段機(jī)械損傷。另外，玻璃珠破碎一般需要儀器，有些試劑盒不買儀器沒法使用，而一般的渦旋也很難取得好的破碎效果。
l 新型腐殖酸去除技術(shù)
采用創(chuàng)新的腐殖酸去除技術(shù)，短時間內(nèi)就可達(dá)到很好的去除效果
l 不需單獨(dú)去除DNA
操作過程中已經(jīng)去除DNA，不需另外單加DNA酶再去除DNA的步驟，省時省力。
因此要想對土壤RNA有較好的提取效果，我們就必須知己知彼，既要對研究對象（土壤）熟知，又要對研究工具（試劑盒）熟悉。
土壤中重要物質(zhì)腐殖質(zhì)
土壤除了為陸生植物提供營養(yǎng)源和水分之外，還是植物生長，進(jìn)行光合作用、能量交換的主要場所；同時也具有微生物生長繁殖所需要的一切營養(yǎng)物質(zhì)及各種條件，是微生物良好的生活場所，有“微生物的天然培養(yǎng)基”之稱。因此土壤是一種重要的環(huán)境要素。
簡單說，土壤是由固相（礦物質(zhì)、有機(jī)質(zhì)）、液相（土壤水分或溶液）和氣相（土壤空氣）三相物質(zhì)四種成分有機(jī)地組成。而所有這些組成在土壤微生物的存在下卻能形成一種對作物生長有利，對科研人員非常不利的物質(zhì)——腐殖質(zhì)。污泥中也不例外，同樣有腐植酸和富里酸存在。
腐殖質(zhì)是由一些異養(yǎng)的微生物，如某些腐生細(xì)菌，把土壤中的動、植物殘體和有機(jī)肥料分解，與礦物質(zhì)顆粒緊密結(jié)合在一起而形成的一種黑色的膠狀物質(zhì)，是土壤有機(jī)質(zhì)的主要類型，一般占土壤有機(jī)質(zhì)總量的85—90％以上。腐殖質(zhì)既含有氮、磷、 鉀、疏、鈣等大量元素，還有微量元素；另外在分解過程中還會產(chǎn)生腐殖酸、有機(jī)酸、維生素及一些激素等。在水體中，腐殖質(zhì)主要指腐殖酸和富里酸。實(shí)驗(yàn)證明，微量腐殖酸或富里酸的存在就會導(dǎo)致PCR的失?。∵@在眾多公司的提取試劑盒中都有相應(yīng)說明。
再加上近期土壤污染（肥料、農(nóng)藥等）的存在，因此導(dǎo)致提取對象成份非常復(fù)雜，提取難度也就可想而知。有的公司產(chǎn)品即使有少量的RNA提出，也會造成科研人員后期的實(shí)驗(yàn)不順暢，這樣的例子已司空見慣。因此解決從土壤提取RNA后腐殖質(zhì)殘留以及其它影響成分的有效去除成了各家公司關(guān)注的焦點(diǎn)。
土壤RNA提取試劑盒
目前市場上常見的試劑盒大概有3-4中，這些試劑盒又通常采用玻璃珠（鋼珠）破碎的方法，然后用玻璃奶和吸附柱反復(fù)漂洗去除雜質(zhì)和腐殖酸，操作過程極其復(fù)雜，一般需要2.5小時以上的操作時間。使用，可能會因?yàn)椴襟E不熟練，超過4個小時。并且有些操作在常溫進(jìn)行，這就很難對RNA進(jìn)行有效保護(hù)，結(jié)果可能會導(dǎo)致即使有RNA的提出，也不再是完整的RNA片段，造成部分或全部降解。
因此，提取過程耗時短，影響物質(zhì)（腐殖質(zhì)等）去除干凈，提取過程RNA穩(wěn)定才是從土壤中輕松獲取高質(zhì)量RNA的必要條件。針對這一目標(biāo)，百泰克公司經(jīng)過多年的不斷探索，集眾家所長，終于開發(fā)了一款非常方便簡單快捷的提取土壤（污泥）中RNA的試劑盒，該試劑盒具有以下特點(diǎn)：
l 操作簡便
整個過程，操作時間僅需1小時，熟練時，能更快，避免操作時間過長RNA降解
l 破碎方法優(yōu)良
采用常見的液氮研磨，既能使RNA處于低溫的保護(hù)狀態(tài)，不容易降解，又不需要特殊的設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)成本。同時還可避免玻璃珠破碎過于劇烈導(dǎo)致的片段機(jī)械損傷。另外，玻璃珠破碎一般需要儀器，有些試劑盒不買儀器沒法使用，而一般的渦旋也很難取得好的破碎效果。
l 新型腐殖酸去除技術(shù)
采用創(chuàng)新的腐殖酸去除技術(shù)，短時間內(nèi)就可達(dá)到很好的去除效果
l 不需單獨(dú)去除DNA
操作過程中已經(jīng)去除DNA，不需另外單加DNA酶再去除DNA的步驟，省時省力。