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GUS染色液的染色步驟說明

閱讀：1879 發(fā)布時間：2023-4-13

　　GUS染色液用于生物化學(xué)活性分析、免疫分析以及組織和細胞的組織化學(xué)染色,多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達。GUS染色液是適宜的反應(yīng)條件下,β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍色物質(zhì),該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細胞核組織中的靛藍物質(zhì),具有GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點,可用肉眼或顯微鏡觀察到。

　　GUS染色步驟：

　　1.預(yù)處理：將葉片、花瓣、根莖等組織剪成小片，放于1.5ml離心管中，加入預(yù)冷的90%丙酮覆蓋材料，常溫處理20-30分鐘。此步驟可以預(yù)固定組織并且可以去除部分葉綠素。

　　注：用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和器官的不同而異。例如，擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預(yù)處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片(1-3mm)。當操作大的組織和樣品時，可以選用真空滲入法來幫助底物滲入細胞。

　　2.染色：用蒸餾水將材料漂洗干凈后置于1.5ml離心管中；加入適量配制好的GUS染色工作液覆蓋材料；錫箔紙包好常溫過夜放置。

　　3.洗脫：用25%, 50% 70%, 95%乙醇梯度洗脫，搖床輕搖每次20分鐘。

　　4.觀察：肉眼或顯微鏡下觀察，白色背景上的藍色小點即為GUS表達位點。

　　當操作大的組織和樣品時可以選用真空滲入法來幫助底物和酶滲入細胞。

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