化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
B9-11細胞增殖法檢測IL—11
閱讀：1314 發(fā)布時間：2012-5-5通過對B9細胞的反復(fù)克隆，篩選出對IL-11高度敏感的B9-11細胞株，可用于IL11的檢測。
1．B9-11細胞的克隆 ①向96孔培養(yǎng)板中每孔加入100uL含5％FCS和100ng／mL rIL-11的PMI-1640培養(yǎng)液；②加B9-11細胞于每孔l、3、9和27個細胞，每一細胞濃度做一板，培養(yǎng)2周，陽性生長孔定期更換培養(yǎng)液和補充rIL-1③取出生長較好孔內(nèi)細胞，測其對IL-11的敏感度，所需IL-11濃度zui低的細胞克隆為B9-11克隆。
2．在96孔板中每孔加50rtl用含5％FCSRPMI-1640系列稀釋的待測樣品和5X103B9-11細胞，每孔終體積為150$tL。5％c02 37~C溫箱中培養(yǎng)4d
3．加MTF溫育4h，加酸化異丙醇溶解甲臘，測630nm—5701an的吸光度值。IL-11活性以UTll65表示，即B9-11細胞發(fā)生50％zui大增殖時稀釋度的倒數(shù)除以30（因B9-11細胞對IL-11的敏感度為T1165細胞的30倍）。
4．注意事項 測定生物標本應(yīng)加抗IL-6McAb以中和IL-6對結(jié)果的影響。