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酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELlSA）診斷禽流感
閱讀：997 發(fā)布時(shí)間：2011-7-12酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)（enzyme inmmnosorbent assay，ELISA），以免疫過(guò)氧化物酶技術(shù)為基礎(chǔ)，創(chuàng)立于1971年。它的基本原理是將抗原或抗體吸附到固相載體的表面，并仍能保持其免疫活性；抗原或抗體與酶所形成的結(jié)合物各自保持其免疫學(xué)活性和酶的催化活性；結(jié)合物與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后，免疫復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)的底物時(shí)，可催化底物水解、氧化或還原，從而產(chǎn)生有色物質(zhì)，可用肉眼觀察。由于反應(yīng)顏色的深淺與相應(yīng)抗體或抗原的量成正比，故可對(duì)抗體或抗原進(jìn)行定量測(cè)定。1974年Jennings等首先用ELISA對(duì)注射流感病毒所產(chǎn)生的抗體消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行了檢測(cè)，Lanbre認(rèn)為ELlSA的敏感性遠(yuǎn)高于HI和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。Meulemans（1987）對(duì)ELISA、AGP、HI檢測(cè)AIV抗體進(jìn)行了比較研究發(fā)現(xiàn)，AGP和ELISA一樣均能檢測(cè)型特異性抗原（抗體）,但其敏感性遠(yuǎn)低于ELISA，HI適用于亞型的檢測(cè)，其敏感性也不如ELISA。
李海燕等用桿狀病毒表達(dá)的AIV病毒核蛋白制備抗原，建立了以桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)的AIV核蛋白為抗原的禽流感間接（重組核蛋白）ELISA診斷技術(shù)（rNPELISA）。實(shí)驗(yàn)證明，rNP-ELISA與全病毒間接ELISA（AIV-ELISA），AGP及HI的符合率分別為99．9％、97．1％和98．8％，并能100％檢出AGP陽(yáng)性及疑似HI陽(yáng)性的血清樣品，這證明了rNP-ELISA是檢測(cè)A型AIV血清特異性抗體的一種特異、敏感、微量、快捷和經(jīng)濟(jì)的血清學(xué)診斷技術(shù)。
1993年，Skodihall建立了快速診斷的DAS-ELISA，大大縮短了診斷時(shí)間，用混合纖維素酯膜或硝酸纖維素膜代替微量反應(yīng)板，可保留ELlSA的特異性、敏感性，其結(jié)果又不需要特殊儀器分析，可肉眼判定。ELlSA法已成為AIV流行病學(xué)普查及早期快速診的zui有效和*的方法。
ELISA方法的敏感性和特異性與抗原的純度直接相關(guān)，1984年Abraham等報(bào)道了抗原快速提純法，所需時(shí)間與常規(guī)的抗原提純法相比縮短10倍，ELISA成為Al流行病學(xué)普查及早期快速診斷的zui有效和*的方法。