化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)
閱讀：964 發(fā)布時(shí)間：2011-1-25（1）農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法 將外植體放入含有外源基因的農(nóng)桿菌（Agrobacteriumtume／ociens）菌液中浸泡，然后轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)基，再轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基誘導(dǎo)抗性愈傷組織和抗性芽，生根后的抗性植株移栽至營(yíng)養(yǎng)缽生長(zhǎng)。
（2）基因槍法 又稱微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金粒或鎢粒表面，然后在高壓的作用下，微粒被高速射入受體細(xì)胞或組織，微粒上的外源DNA進(jìn)入細(xì)胞后，整合到植物染色體上，得以表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)化。
（3）花粉管通道法 在植物授粉時(shí)將含目的基因的DNA溶液涂于柱頭上，利用植物在開(kāi)花、受精過(guò)程中形成的花粉管通道，將外源DNA導(dǎo)入受精卵細(xì)胞，并進(jìn)一步地整合到受體細(xì)胞的基因組中，隨著受精卵的發(fā)育而成為含轉(zhuǎn)基因的新個(gè)體。該方法于80年代初期由我國(guó)學(xué)者周光宇提出。我國(guó)目前推廣面積zui大的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉就是用花粉管通道法培育出來(lái)的。該法的zui大優(yōu)點(diǎn)是不依賴組織培養(yǎng)人工再生植株，技術(shù)簡(jiǎn)單，不需要裝備精良的實(shí)驗(yàn)室，常規(guī)育種工作者易于掌握。
（4）微注射法 首先制備植物原生質(zhì)體，游離出細(xì)胞，在倒置顯微鏡和顯微操作器的幫助下，將目的基因DNA通過(guò)微管注射到受體細(xì)胞中。
（5）電穿孔法 在短時(shí)間的高壓直流電脈沖的沖擊下，可以使原生質(zhì)膜的分子疏松，形成暫時(shí)性的直徑為3～4nl-n的小孔，但對(duì)原生質(zhì)體生活力影響不大。這時(shí)，存在于原生質(zhì)體周?chē)芤褐械耐庠碊NA，就可以通過(guò)這種小孔進(jìn)入原生質(zhì)體，實(shí)現(xiàn)基因的直接轉(zhuǎn)移。
（6）微束激光打孔法 原生質(zhì)體在短時(shí)間的微束激光照射下，可在質(zhì)膜表面形成面積約0．25Pm2左右的小孔，使DNA分子進(jìn)入細(xì)胞。