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檢測大腸桿菌的PCR技術(shù)
閱讀:791 發(fā)布時(shí)間:2011-1-19 中美學(xué)者合作,對3.3kb的DNA探針進(jìn)行了序列分析,發(fā)現(xiàn)其編碼EHEC溶血素AB基因,此基因與已發(fā)表的泌尿道大腸桿菌等的溶血素在DNA序列和氨基酸序列有所不同,是EHEC*的,并以此為基礎(chǔ),發(fā)展了PCR檢測方法。此法特異、敏感、快速,可在3—4h左右出結(jié)果。
Brian等針對VT基因A亞單位分別設(shè)計(jì)出SLTl引物和SLT2引物和雜交用的寡核苷酸探針。兩對引物可同時(shí)擴(kuò)增EHEC的SLTl和SLT2,先后擴(kuò)增出370bp和283bp的產(chǎn)物,并用放射性探針予以證實(shí),而非EHEC擴(kuò)增為陰性。這種方法還可檢測小到一個(gè)細(xì)菌的基因組,并可用來檢測大便中的DNA而無需預(yù)先分離和培養(yǎng)細(xì)菌。
另外,F(xiàn)ratamico等還設(shè)計(jì)了一種多重PCR方法,即利用EHEC所*的eoe基因、SLTl和SLT2、60Mμ質(zhì)粒的保守序列設(shè)計(jì)的多重引物,成功地同時(shí)擴(kuò)增得到了1087bp(eaeA)、227bp和224bp(SLTl和SLT2)、166bp(質(zhì)粒),這種多重PCR方法靈敏、特異和快速,可用來診斷產(chǎn)SLT的0157所致的疾病,也可對糞便標(biāo)本的增菌培養(yǎng)物直接進(jìn)行擴(kuò)增,結(jié)果比傳統(tǒng)的SMAC漏檢率減少。Venkateswaran等還用復(fù)合PCR-簡單過濾技術(shù)檢測出牛肉中含有的腸出血性大腸桿菌0157;H7及其毒素。