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RNA操作指南
閱讀：794 發(fā)布時(shí)間：2010-12-9RNA抽提純化是分子生物學(xué)研究的基本工作內(nèi)容。但是由于RNA酶（RNase）的廣泛存在和難以滅活的特性，使RNA的抽提純化和后續(xù)工作十分困難。即使Trizol試劑和各類RNA抽提純化試劑盒的廣泛應(yīng)用使RNA抽提和純化變得方便快捷，但是涉及RNA的工作仍然是分子生物學(xué)研究中zui讓人棘手的。為了保證您的工作成功，請(qǐng)仔細(xì)閱讀本操作指南，相信它能幫助您解決常見(jiàn)的問(wèn)題。
總而言之，RNA工作順利與否的關(guān)鍵是防止RNA酶的污染。RNase無(wú)處不在，在實(shí)驗(yàn)操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不妥當(dāng)?shù)牟僮鞫加锌赡茉斐蒖Nase的污染，從而導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)的失敗。因此，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，避免任何可能的污染，是保證實(shí)驗(yàn)成功的先決條件。為此，必須作到以下幾點(diǎn)：
- 盡可能在實(shí)驗(yàn)室專門辟出RNA操作區(qū)，離心機(jī)、移液器、試劑等均應(yīng)。RNA操作區(qū)應(yīng)保持清潔，并定期進(jìn)行除菌。
- 操作過(guò)程中應(yīng)始終戴一次性橡膠手套，并經(jīng)常更換，以防止手、臂上的細(xì)菌和真菌以及人體自身分泌的RNase帶入各種容器內(nèi)或污染用具。盡量避免使用一次性塑料手套。塑料手套不僅常常給操作帶來(lái)不便，而且塑料手套的多出部分常常將器具有RNase處傳遞到RNase-free處，擴(kuò)大污染。
- 盡量使用一次性的塑料制品，避免共用器具如濾紙、tips、tubes等，以防交叉污染。例如，從事RNA探針工作的研究者經(jīng)常使用RNase H、T1等，在操作過(guò)程中極有可能造成移液器、離心機(jī)等的污染。而這些污染了的器具是RNA操作的大敵。
- 配制溶液用的乙醇、異丙醇、Tris等應(yīng)采用未開(kāi)封的新瓶裝試劑。
- 關(guān)于一次性塑料制品，建議使用廠家供應(yīng)的出廠前已經(jīng)滅菌的tips和tubes等。多數(shù)廠家供應(yīng)的無(wú)菌塑料制品很少有RNase污染，買來(lái)后可直接用于RNA操作。用DEPC等處理的塑料制品，往往由于二次污染而帶有RNase，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。
- 所有玻璃器具都必須在150℃烘烤4小時(shí)。
- 如果您需要長(zhǎng)期儲(chǔ)藏或運(yùn)輸RNA樣品，請(qǐng)將您的RNA樣品溶解在Sangon提供的RNApro中，它可以在常溫下保證您的RNA樣品在一年內(nèi)不會(huì)發(fā)生降解。
無(wú)法用DEPC處理的用具可用氯仿擦拭若干次，這樣通常可以消除RNase的活性。