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艱難梭菌毒素A+B抗原檢測

ELISA操作孵育過程常見問題及解答
1） 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；
2） 孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

3）孵育溫度未按照說明書要求進(jìn)行，溫度過高或過低；
解決辦法：
1） 貼封片或加蓋；
2） 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間和孵育溫度。

通用名稱：艱難梭菌毒素A+B抗原檢測
英文名稱：C. difficile toxin A+B antigen detection
公司品牌：德國DRG
儲(chǔ)存條件：2-8℃
檢測方法：ELISA方法
預(yù)期用途：用于定性檢測糞便和細(xì)胞上清液中的艱難梭菌毒素A+B抗原。
參考價(jià)格：詢價(jià)
產(chǎn)品貨號(hào)：EIA-4448
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測樣本：糞便、細(xì)胞上清液
供應(yīng)商家：深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司

艱難梭菌毒素A+B抗原檢測試劑盒預(yù)期用途
      艱難梭菌毒素A+B抗原檢測僅用于體外檢測，定性檢測糞便和細(xì)胞上清液中的艱難梭菌毒素A+B抗原。

艱難梭菌簡介
      艱難梭菌是人類腸道內(nèi)的正常菌群，如果過度服用抗生素，艱難梭菌就會(huì)變成致病菌。Hall 和 O’Toole在1935年將此菌分類到了可產(chǎn)生毒素的菌群中。艱難梭菌的毒素株會(huì)產(chǎn)生兩類毒素：毒素A，腸毒素；毒素B，細(xì)胞毒素。直到1970后期，人們發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌與偽膜性腸炎有所關(guān)聯(lián)時(shí)才確定艱難梭菌是致病菌。偽膜性腸炎是一類與抗生素相關(guān)聯(lián)的疾病，主要發(fā)生腹瀉和急性粘膜壞死性炎癥，從而形成由纖維蛋白、粘液層、壞死上皮細(xì)胞和白血球構(gòu)成的克隆偽膜性腸炎。
       盡管在50%多的無癥狀克隆嬰兒患者的糞便中發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌毒素，而且還有高濃度的毒素A和毒素B，但是只有少數(shù)會(huì)最終患有PMC（偽膜性腸炎），剩余的都是無癥狀的。對(duì)于這種現(xiàn)象可能的原因包括：母乳能夠中和毒素A和毒素B，胎兒腸細(xì)胞對(duì)毒素A的敏感度降低，或者是缺乏毒素受體。少數(shù)病例顯示，囊性纖維變性患者對(duì)PMC（偽膜性腸炎）敏感度降低。診斷抗生素與結(jié)腸炎相關(guān)的普遍的臨床方法是細(xì)胞培養(yǎng)和乳膠凝集試驗(yàn)。
       細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)毒素B對(duì)細(xì)胞的一個(gè)影響作用，這個(gè)試驗(yàn)的敏感度很高（50pg/ml毒素B），但是最少也要2天才可以完成。乳膠凝集是一種可以通過糞便來篩查出與艱難梭菌相關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)的方法，即使交叉反應(yīng)和不會(huì)產(chǎn)生毒素的艱難梭菌也會(huì)被檢測出來。很多研究者已表明酶聯(lián)免疫法可以檢測出1-10ng/ml的毒素A或是毒素B。

艱難梭菌毒素A+B抗原檢測原理
       檢測糞便中的艱難梭菌毒素A+B抗原利用的是夾心法。糞便或者細(xì)胞上清液中的艱難梭菌和陽性質(zhì)控與包被孔中的單克隆抗毒素A和B抗體反應(yīng)，溫育后，未連接的成分被洗滌除去。然后在第二次溫育中連接到包被孔的毒素會(huì)特異性地與生物素化的多克隆抗毒素A和B抗體反應(yīng)，未連接的材料會(huì)被洗滌除去。
       在下一步的溫育中，辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素會(huì)與生物素化的抗體反應(yīng)，經(jīng)洗滌步驟除去未連接酶聯(lián)物。然后加入底物顯色液TMB，顯藍(lán)色，加入終止液終止反應(yīng)，溶液由藍(lán)色變成了黃色。在酶標(biāo)儀上讀取吸光度，吸光度直接與艱難梭菌毒素A和B的量成正比例。經(jīng)與臨界值比較，可以判定結(jié)果為陽性或者陰性。

艱難梭菌毒素A+B抗原檢測試劑盒組成

艱難梭菌毒素A+B抗原檢測試劑的制備和保存

       各成分的有效期見于各自的標(biāo)簽，完整的試劑盒有效期見于盒子標(biāo)簽。收到試劑盒后，放在原始的試劑盒箱子里于2-8℃保存。所有的成分開瓶后，在適當(dāng)?shù)谋４鏃l件下，至少可以穩(wěn)定2個(gè)月。稀釋后的洗滌緩沖液在2-8℃，至少可以保存1個(gè)月。

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