孕烯醇酮Pregnenolone檢測(cè)試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：孕烯醇酮檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Pregnenolone ELISA

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預(yù)期用途】

孕烯醇酮（Pregnenolone）激素檢測(cè)試劑盒可用于人血清中孕烯醇酮的定量檢測(cè)。

【前言簡(jiǎn)介】

孕烯醇酮（3β-羥基-孕甾-5-烯-20-酮）是膽固醇的類固醇生成途徑產(chǎn)生的第一種類固醇，且是所有腎上腺和性腺類固醇的共同前體。它是通過在線粒體上的膽固醇經(jīng)膽固醇側(cè)鏈裂解酶催化作用產(chǎn)生的。一旦生成，孕烯醇酮將就會(huì)被兩種類固醇生成途徑所利用。孕烯醇酮可通過17α-羥化酶的作用轉(zhuǎn)換成17-羥孕烯醇酮或者通過3β-羥基類固醇脫氫酶的作用轉(zhuǎn)換成孕酮。

在先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥（CAH）中，由于3β-羥基類固醇脫氫酶或17α-羥化酶的缺乏，導(dǎo)致孕烯醇酮水平的升高。高水平的孕烯醇酮也發(fā)生在女性特發(fā)性多毛癥中。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，孕烯醇酮的水平在性別和年齡方面差異明顯，在最大水平一般發(fā)生在17歲女性和16歲男性中，然而低水平一般體現(xiàn)在37歲女性和38歲男性中?？偟膩碚f，女性體內(nèi)的孕烯醇酮一般略高于男性。孕烯醇酮的生理機(jī)能的許多領(lǐng)域仍有待調(diào)查。目前有研究表明檢測(cè)血清中的孕烯醇酮有助于研究其代謝產(chǎn)物、硫化孕烯醇酮在哺乳動(dòng)物的大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的各種影響。

【檢測(cè)原理】

此孕烯醇酮（Pregnenolone）激素檢測(cè)試劑盒采用的是典型的競(jìng)爭(zhēng)法。未標(biāo)記的抗原（存在于標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品中）和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合微孔板上有限的抗體結(jié)合位點(diǎn)。溫育，洗板，加入底物液進(jìn)行顏色反應(yīng)，樣品中抗原的量與顏色強(qiáng)度成反比，結(jié)果可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到。

【主要組成成分】

微孔板          12×8孔，包被了抗孕烯醇酮多克隆抗體。

酶聯(lián)物（50×）   300μL，1支，內(nèi)含HRP標(biāo)記的孕烯醇酮，蛋白緩沖液，無汞防腐劑

標(biāo)準(zhǔn)品A         2ml，1支，即用，內(nèi)含孕烯醇酮，蛋白緩沖液，無汞防腐劑

標(biāo)準(zhǔn)品B-F       1ml，5支，即用，內(nèi)含孕烯醇酮，蛋白緩沖液，無汞防腐劑。

質(zhì)控品          1ml，2支，即用，內(nèi)含孕烯醇酮，蛋白緩沖液，無汞防腐劑.范圍見標(biāo)簽或質(zhì)控單

洗滌液（10×）   50ml，1瓶，無離子洗滌劑的緩沖液和無汞防腐劑

分析緩沖液      17ml，1瓶，蛋白緩沖液，無汞防腐劑

TMB底物液      18ml，1瓶，內(nèi)含TMB過氧化氫，不含DMF或DMSO的緩沖液

終止液          8ml，1瓶，1M硫酸

所需材料（未提供）

1） 移液器，50；100；150和300μl

2） 蒸餾水或去離子水

3） 8通道移液器

4） 定軌搖床（600rpm）或直線搖床（200rpm）

5） 酶標(biāo)儀

6） 吸水紙，槍頭和計(jì)時(shí)器

【儲(chǔ)存條件】

試劑盒于2～8℃下可儲(chǔ)存至標(biāo)簽上的效期。 

【樣本要求】

雙孔實(shí)驗(yàn)至少需要0.2ml的血清樣本。至少要采集4-5ml的血液，待凝血完成后離心取出血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的，4℃條件下可儲(chǔ)存24小時(shí)，-10℃或更低溫度條件下可儲(chǔ)存稍長(zhǎng)時(shí)間。

【檢測(cè)方法】

檢測(cè)開始前，將所有試劑平衡至室溫 。標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品均做雙孔。

標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品

標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品一旦打開，必須在14天內(nèi)使用或者分裝凍存起來，避免反復(fù)凍融。

酶聯(lián)物

按1：50進(jìn)行稀釋，如：40 μL酶聯(lián)物 + 2ml分析緩沖液。現(xiàn)配現(xiàn)用

洗滌液

按1:10的比例用蒸餾水進(jìn)行稀釋。

檢測(cè)步驟

1）標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品吸取50μL至相應(yīng)孔內(nèi)

2）每孔加入100μL現(xiàn)配的酶聯(lián)液

3）室溫（18-25℃）下震蕩溫育1h

4）每孔加入300μL的洗滌緩沖液洗板3次，倒去孔內(nèi)液體，吸水紙上拍干（建議使用洗板機(jī)洗板）

5）如果條件允許，建議加底物液和終止液時(shí)使用8通道移液器。

6）每孔加入150μL的TMB底物液

7）室溫下振蕩溫育10-15min（或是直到標(biāo)準(zhǔn)品A變成深藍(lán)色）

8）按照步驟6）的加樣順序相同的間隔時(shí)間，每孔加入50μL的終止液，輕輕晃蕩微孔板使其混勻

9）加入終止液后20min內(nèi)在酶標(biāo)儀450nm處測(cè)定OD值

*如果OD值超過450nm濾光片的檢測(cè)上限，我們可用405nm或415nm代替，OD值可能會(huì)比較低，但它并不會(huì)影響樣品和質(zhì)控品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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