本公司新推出的全新細(xì)菌基因組純化試劑盒，操作簡(jiǎn)便，純化量大，可純化革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌的基因組DNA。
細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒使用說(shuō)明
本試劑盒可用于革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌的基因組DNA提取，由細(xì)菌重懸液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液組成?？蓮?/span>1-5ml菌液中提取基因組DNA。整個(gè)提取過(guò)程不超過(guò)45分鐘。提取過(guò)程包括：1菌液離心，重懸。2裂解菌體，釋放基因組DNA。3鹽析沉淀蛋白，分離DNA。4異丙醇沉淀脫鹽并濃縮。5 70%乙醇清洗，晾干并用DNA溶解液溶解。本試劑盒采用復(fù)合裂解液，其中含有抑制DNA酶的成分，在加熱（65°C）狀態(tài)下，可保證完整的細(xì)菌基因組DNA的充分裂解釋放，本試劑盒即可提取異丙醇沉淀時(shí)，罕見(jiàn)渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)的共沉淀。提取的基因組可用于PCR擴(kuò)增、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等。
一、 試劑盒組成（本試劑盒提供的組份, 至少可提取100份1-5ml菌液基因組DNA的純化，每種組份均有足夠的富余量）
1． 復(fù)合裂解液：30ml´1瓶。
2． 蛋白沉淀液：300ml´1瓶。
3． DNA溶解液：20ml´1瓶。
4． 操作說(shuō)明書(shū)一份。
二、 本試劑盒未提供，須用戶自備的試劑為：異丙醇，70%乙醇（國(guó)產(chǎn)分析純）。
三、 提取操作：
1． 菌液離心：取革蘭氏陰性菌菌液1-2ml；或者革蘭氏陽(yáng)性菌菌液2-5ml，1000rpm離心1分鐘。
2． 加入細(xì)菌重懸液100ul，震蕩使菌體重懸。
3． 將復(fù)合裂解液置65°C水浴加熱，使結(jié)晶成分溶解，每個(gè)細(xì)菌重懸液中分別加入300ul的復(fù)合裂解液。
4． 混璇器震蕩混勻10秒，置65°C水浴中反應(yīng)10分鐘（革蘭氏陰性菌），20分鐘（革蘭氏陽(yáng)性菌）。
5． 各管中加入300ul蛋白沉淀液。上下顛倒5-6次使兩者混勻。
6． 13000-16000×g, 離心3-5分鐘。
7． 將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中（注意：由于有些細(xì)菌含有多糖或者脂蛋白成分，離心后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞成分上浮的情況，此時(shí)取漂浮層下的均一透明液體），加入等體積異丙醇，此時(shí)可見(jiàn)透明的絮狀物，混勻后離心，同步驟5，吸去上清。
8． 離心管中加入200ul，70%的乙醇溶液，來(lái)回倒置，清洗管壁，離心同上。
9． 移去70%乙醇，倒置離心管于干凈的濾紙上，自然干燥10-15分鐘，加入DNA溶解液100ul。
10．快速漩渦震蕩1-2秒，使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。
11．將純化的全血基因組置65ºC水浴1小時(shí)，或4ºC過(guò)夜使DNA充分溶解（要求不嚴(yán)格的PCR試驗(yàn)可縮短時(shí)間或省去該步），輕輕彈動(dòng)管壁有助于溶解基因組DNA可直接進(jìn)行PCR等下一步操作。
四、注意事項(xiàng)：
1. 用戶可選擇使用RNase A, 使用方法為：在第3步完成后1.5ul RNase A, 混勻后，37ºC孵育15分鐘，冷卻至室溫。（RNase A的配法：將RNase A溶于TE buffer中，濃度為4mg/ml, 煮沸10分鐘，以去除DNase, 分裝后-20ºC保存；也可購(gòu)買配好的試劑使用。）
2. 革蘭氏陽(yáng)性菌由于細(xì)胞壁的存在，純化的量較陰性菌要少一倍以上。
3. 提取得DNA樣本在70%乙醇中，存于-80ºC，可長(zhǎng)期保存。
五、儲(chǔ)存條件：本試劑盒在室溫條件下可保存一年。
