EIASA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-8

    IL-8來(lái)源于單個(gè)核細(xì)胞，其主要的生物學(xué)活性有：引導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞趨化、脫粒、釋放溶菌酶，加強(qiáng)炎癥防護(hù)；促進(jìn)嗜堿性粒細(xì)胞趨化、脫粒、釋放組胺，加強(qiáng)過(guò)敏反應(yīng)；使T細(xì)胞趨化、游走，加強(qiáng)免疫。HBV感染能誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成大量TNF-a，而TNF-a又可誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成IL-8，IL-8促進(jìn)肝內(nèi)炎癥反應(yīng)，介導(dǎo)肝細(xì)胞損傷，誘導(dǎo)各類(lèi)細(xì)胞分化增殖，從而使慢性肝臟炎癥持續(xù)存在，并導(dǎo)致纖維化形成。HCV感染能使機(jī)體細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生TNF-a、IL-8等多種促炎細(xì)胞因子，從而誘導(dǎo)肝損傷。

    [檢測(cè)方法]  EIASA法

    [方法學(xué)原理]  在微孔反應(yīng)板上包被抗人IL-8單克隆抗體，待測(cè)標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)晶中的IL-8會(huì)與抗人IL-8單克隆抗體結(jié)合，游離的成分被洗去，同時(shí)加入生物素化的抗人IL-8抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素。生物素與親和素特異結(jié)合，抗人IL-8抗體與結(jié)合在單克隆抗體上的人IL-8結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有IL-8，HRP會(huì)使五色的顯色劑呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液變黃色。在波長(zhǎng)450nm處測(cè)吸光度，IL-8濃度與吸光度成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的IL-8濃度。

    [標(biāo)本準(zhǔn)備]  靜脈采血2ml，不抗凝

    [試劑]

    1．預(yù)包被微孔反應(yīng)板

    2．濃縮酶結(jié)合物

    3，酶結(jié)合物稀釋液

    4．標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本稀釋液

    5．濃縮生物素化抗體

    6．IL-8標(biāo)準(zhǔn)晶

    7．濃縮洗滌液

    8．顯色劑A、B

    9．終止液

    [儀器]  酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。

    [檢測(cè)步驟]

    1．在微孔反應(yīng)板相應(yīng)孔中分別加入待測(cè)樣本、不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul，再加生物素化抗體工作液50ul。

    2．振蕩混勻，置20～25℃環(huán)境中溫育120min。

    3．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。

    4．除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液100ul。

    5．振蕩混勻，置20-25℃環(huán)境中溫育30min。

    6．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。

    7．每孔加入顯色劑A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境中避光顯色10min。

    8．加入終止液50ul后，輕輕振蕩混勻。用酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照，求出IL-8水平。

    [正常參考值]  各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)檢測(cè)方法的不同確立正常參考值。

    [注意事項(xiàng)]

    1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔條用自封袋密封保存。

    2．酶標(biāo)板洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。應(yīng)設(shè)定30～60s的洗滌浸泡時(shí)間。

    3．滴加試劑前應(yīng)將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。滴加時(shí)瓶身應(yīng)保持垂直，以使滴量準(zhǔn)確。

    4．所有樣品和廢棄物都應(yīng)按傳染源處理。終止液為2mol／L硫酸，使用時(shí)應(yīng)注意安全。

    5．每批樣本應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    [臨床意義]  慢性活動(dòng)性肝炎患者血清IL-8水平上升，且與病情相一致。急性白血病患者外周血IL-8水平明顯高于正常人；動(dòng)態(tài)觀察骨髓移植患者血清IL-8水平有助于預(yù)測(cè)干細(xì)胞移植后粒細(xì)胞的恢復(fù)期；監(jiān)測(cè)血清IL-8水平還可預(yù)測(cè)感染。

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