IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測(cè)定

    IL-4能阻斷IFN對(duì)L929細(xì)胞的保護(hù)作用，其拮抗程度與IL-4濃度相關(guān)，據(jù)此可通過(guò)對(duì)L929細(xì)胞保護(hù)作用的抑制率來(lái)反映樣本中IL-4的含量。

    （1）取生長(zhǎng)良好的L929細(xì)胞傾去培養(yǎng)液，加入0．25％胰酶消化后，充分洗滌細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×10⁵—3×10⁵／mL，每孔加1001~L，37℃，5％C02溫箱中培養(yǎng)24h。

    （2）采用9—10日齡雞胚，制備成纖維細(xì)胞單層培養(yǎng)，接種適量VSV病毒。當(dāng)細(xì)胞病變達(dá)+++—++++時(shí)，收獲病毒，并進(jìn)行病毒TCID50測(cè)定。

    （3）將待檢上清和rlL-4分別與4U／mL IFN混合，在L929細(xì)胞培養(yǎng)孑L內(nèi)加100／zL。37~C，5％c02溫箱中孵育24h。

    （4）VSV攻擊：每孔加100uL病毒懸液，含200TCIDso；置37~C，5％C02溫箱培養(yǎng)48h，待病毒對(duì)照孔病變達(dá)+++—++++，細(xì)胞對(duì)照正常時(shí)，測(cè)定結(jié)果。

    （5）將培養(yǎng)液全部倒出，用Hanks液洗3次；每孔加入100bL0．5％結(jié)晶紫染色液，染10—20rain棄去，Hanks液洗3次，加入95％酒精。放小型振蕩器上振搖15min左右，待細(xì)胞內(nèi)染料*溶解。用分光光度計(jì)540nm波長(zhǎng)測(cè)OD值，以準(zhǔn)確客觀地反映細(xì)胞存活數(shù)量。

    （6）注意事項(xiàng)：①L929細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)條件不良時(shí)，可呈圓形漂浮狀，此時(shí)更換培養(yǎng)液可使其恢復(fù)為梭形貼壁細(xì)胞；②L929細(xì)胞要均勻分散于培養(yǎng)板孔中，否則可能造成某個(gè)部位細(xì)胞過(guò)密，另一部分過(guò)稀，將影響細(xì)胞單層的形成。

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