多肽激素標(biāo)志物酶聯(lián)免疫測定的標(biāo)準(zhǔn)化

    常用的多肽激素標(biāo)志物主要有hCG，LH，FSH和TSH等，這四種糖蛋白激素均由一個(gè)共同的。亞單位和一個(gè)特異的臼亞單位組成。LH和hCG的p亞單位非常相似，這給建立其特異的測定方法帶來了麻煩。

    雜交瘤技術(shù)帶來的單克隆抗體使得hCG及其亞單位的特異測定成為可能，但仍存在很多問題，一個(gè)主要的問題是，是否所建立的方法既能測定hCG又能測定hCGp，或二者要用分別的方法測定。二者用分別的方法測定在理論上*可以做到，但聯(lián)合測定有實(shí)際上的優(yōu)點(diǎn)。目前大多數(shù)hCG測定方法既測定hCG又測定hCGp，由于它們有可能使hCGp測定偏高而使其標(biāo)準(zhǔn)化較為復(fù)雜，如果該測定方法用來測定hCGp與hCG之比；就會(huì)有問題。在孕婦該比例小于3％，但樣本在室溫中貯存會(huì)因?yàn)殡逆湹牡鞍姿庾饔?/span>（nicking，刻痕）使hCG解離成亞單位。

    hCG和hCG臼的刻痕形式尤其是出現(xiàn)于癌癥患者，但孕婦也有。由于二硫鍵的存在，刻痕形式的hCG的基本結(jié)構(gòu)仍會(huì)保留，但對抗體的結(jié)合能力會(huì)有所降低。因此，HCG測定標(biāo)準(zhǔn)化的一個(gè)重要目的是確定hCG的分子形式和建立特異的測定方法，這就要求有不同形式的hCG純化標(biāo)準(zhǔn)品和參考測定方法。目前使用的第三代hCG標(biāo)準(zhǔn)品（1S）是用生物試驗(yàn)校準(zhǔn)的，單位（U）可溯源至第二和*代IS。hCGa和hCGp標(biāo)準(zhǔn)品的濃度也以U表示，盡管其缺乏hCG活性，1U的hCGa和hCGp標(biāo)準(zhǔn)品相當(dāng)于其各自lrtg的量，比較之下，1 U的hCG約為0．1lp．g。

    hCG／hCGp在臨床上有重要價(jià)值，該比率的計(jì)算應(yīng)根據(jù)摩爾濃度。此外，hCG的hCGp亞單位的一個(gè)片段即所謂的核心片段（hCGpcf）常以較高濃度出現(xiàn)于孕婦尿中，在男性和非孕婦尿中的濃度則很低，但在各種癌癥患者尿中常見升高。該片段可能來自于hCG和hCGp在腎小管中的降解，根據(jù)血清hCGp水平與尿中hCGBc{水平之間的相關(guān)性，癌癥患者hCGpcf的增高可能是由于腫瘤組織表達(dá)hCGp所致。由于hCG臼cf可作為數(shù)種腫瘤的標(biāo)志物，因此，其測定的標(biāo)準(zhǔn)化也是重要的。

    由前所述，LH和hCG有高度的相似性，交叉反應(yīng)難以*避免。因?yàn)樵谀行院头窃袐DhCG的濃度很低，因此LH與hCG之間存在的交叉反應(yīng)對LH的臨床實(shí)際測定影響不大，盡管如此，大多數(shù)試劑廠家仍致力于建立特異的LH測定方法。雖然在許多方法中hCG的交叉反應(yīng)僅為0．01％～o．1％，但在臨床上的應(yīng)用仍受局限。很小的交叉反應(yīng)也可能會(huì)引起混淆，因?yàn)?/span>hCG水平在1 000～10 000U／L的孕婦將有一個(gè)約為10的明顯的LH水平。

    hCG交叉反應(yīng)的LH測定試驗(yàn)通常要使用兩種單克隆抗體，既與LH亞單位反應(yīng)也識(shí)別完整LH，因此，這些試驗(yàn)也測定游離的p亞單位及其片段，由于正常情況下血清中沒有這些成分，故血清測定不會(huì)成為問題。使用單克隆抗體一個(gè)可能存在的問題是其不能測定蛋白抗原的遺傳變異體，LH的一個(gè)遺傳變異體表現(xiàn)出與單克隆抗體的免疫反應(yīng)性明顯降低，這是由于編碼基因上的點(diǎn)突變導(dǎo)致出現(xiàn)了一個(gè)新的糖基化位點(diǎn)，于是增加的糖鏈封閉了相應(yīng)的抗原決定簇。

    臨床上常要求TSH的測定試驗(yàn)有較好的測定下限，使得試劑廠家不斷發(fā)展具有更低測定下限的試驗(yàn)，所謂的第二和第三代試驗(yàn)已取代了*代放免試驗(yàn)，第二代試驗(yàn)的測定下限約為0．1～0．2U／L，第三代試驗(yàn)約為0．01～0．02U／L。第三代試驗(yàn)應(yīng)能可靠地測定甲亢時(shí)出現(xiàn)的稍有異常的TSH濃度，從而使得TSH可作為甲狀腺功能的*線實(shí)驗(yàn)。TSH試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化做得比較好，但在測定下限及低濃度測定的重復(fù)性上有時(shí)變異較大。而對于這種甲狀腺功能的*線實(shí)驗(yàn)，應(yīng)使用臨床樣本來評價(jià)其真正的測定下限。

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