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熒光顯微鏡觀察細胞熒光染色

點擊次數(shù)：4209 發(fā)布時間：2011-9-15

熒光顯微鏡觀察細胞熒光染色

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一、熒光顯微鏡的成像原理

熒光顯微鏡是一種較為常用的的光學顯微鏡，其基本原理是利用一定波長的激發(fā)光對樣品進行激發(fā)，使之產生一定波長的熒光，從而用于對樣品結構或其組分進行定性、定位、定量觀察檢測。

什么是熒光?

物質中的電子吸收光的能量由低能狀態(tài)轉變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時釋放出的光。

即：物質吸收短波光，發(fā)射出的長波光。

熒光的性質

保持固有的熒光特性

熒光波長＞激發(fā)波長

熒光強度極小于激發(fā)光的強度

有不同程度的衰減

熒光強度取決于激發(fā)光強度、被檢物濃度、熒光效率

熒光顯微鏡的優(yōu)點和用途（生物秀儀器頻道www.bbioo.com）

優(yōu)點：

檢出能力高

對細胞的刺激小

能進行多重染色

用途：

物體構造的觀察

熒光的有無、色調比較進行物質判別

發(fā)熒光量的測定對物質定性、定量分析

實驗目的與教學要求

1.掌握熒光顯微鏡的成像基本原理及其使用；

2.掌握暗視野顯微鏡的成像基本原理及其使用。

熒光素的特性

熒光顯微鏡技術在生命科學研究中的應用

1.對細胞結構或組分的定性、定位、半定量研究。

2.作為生物大分子篩選與鑒定的標記物。

二、暗視野顯微鏡的成像原理

通過特殊的暗視野聚光器，使照明光線改變途徑，不直接進入物鏡，而是傾斜地照射到樣品上，由樣品表面的繞射光線入射到物鏡內，產生樣品的衍射圖象。

三、試劑與器材

青蛙、洋蔥、人正常肝組織切片和脂肪肝組織切片（HE染色）

甲醇、1‰丫啶橙、濾紙、吸管、載玻片

熒光顯微鏡、暗視野顯微鏡、普通光學顯微鏡

四、實驗內容和實驗步驟

1.蛙血細胞染色觀察：取少許蛙血→常規(guī)血涂片→涼干→甲醇固定10min→1‰丫啶橙染色5min→水洗→

室溫

干燥（濾紙擦干玻片底面）→熒光顯微鏡觀察（先低倍后高倍觀察）（可在同一玻片上觀察未熒光染色的血細胞）

2.取洋蔥→撕取一小片內表皮→平面單層鋪展于玻片上→室溫涼干→1‰丫啶橙染色5min→水洗（用吸管，小心掉片）→室溫干燥（或用濾紙擦干）

→熒光顯微鏡觀察

3.暗視野顯微鏡觀察蛙血細胞（示范）

4.觀察人正常肝組織切片和脂肪肝組織切片（HE染色）

五、注意事項

熒光顯微鏡要在光線盡量暗的環(huán)境下觀察。

使用熒光顯微鏡時要注意不要直接觀察激發(fā)光源，保護眼睛。

暗視野顯微鏡要在光線盡量暗的環(huán)境下觀察。

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